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菁優(yōu)網(wǎng)銅綠假單胞菌常常引起禽類、水貂等發(fā)生敗血癥及呼吸系統(tǒng)感染等疾病,給養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴重損失??蒲腥藛T嘗試克隆和表達該菌外膜蛋白oprD基因,以用于后期的疫苗研制工作。相關限制酶識別序列及用于構建基因表達載體的質(zhì)粒圖示如圖,其中AmpR表示氨芐青霉素抗性基因,請回答下列問題:
限制酶 識別序列
BamHⅠ 5'-GGATCC-3'
EcoRⅠ 5'-GAATTC-3'
NotⅠ 5'-GCGGCCGC-3
XhoⅠ 5'-CTCGAG-3'
(1)目的基因只有正確插入
啟動子和終止子
啟動子和終止子
之間才能正確表達。在表達載體中AmpR作為
標記基因
標記基因
。
(2)若已知銅綠假單胞菌的oprD基因序列,可利用PCR技術快速大量擴增該基因,PCR 擴增的原理是
DNA半保留復制
DNA半保留復制
,為使 PCR反應體系中的模板解為單鏈,需要滿足的條件是
加熱(90℃以上)
加熱(90℃以上)
。為便于擴增的oprD基因與表達載體的連接,在設計引物時,常在兩條引物的
5'
5'
端加上限制酶的識別序列,設計后的引物如下:
引物1:5′-CGGGATCCATGAAAGTGATGAAGTGG-3′
引物2:5′-CCCTCGAGTTACAGGATCGACAGCGG-3′
(3)根據(jù)上題中的引物信息分析,在構建oprD基因表達載體時,可選擇
BamHⅠ
BamHⅠ
XhoⅠ
XhoⅠ
兩種不同的限制酶同時切割目的基因和質(zhì)粒,以提高目的基因和質(zhì)粒的重組效率。
(4)將基因表達載體與經(jīng)
Ca2+
Ca2+
處理 的處于感受態(tài)的受體菌細胞于緩沖液中混合,完成轉(zhuǎn)化過程。將完成轉(zhuǎn)化的受體菌接種在加有
氨芐青霉素
氨芐青霉素
的培養(yǎng)基上初步篩選后,再進-步檢測、鑒定。

【答案】啟動子和終止子;標記基因;DNA半保留復制;加熱(90℃以上);5';BamHⅠ;XhoⅠ;Ca2+;氨芐青霉素
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:34引用:2難度:0.7
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    發(fā)布:2024/12/20 5:0:2組卷:35引用:5難度:0.6
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    (1)獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應用的生物技術有
     
    (答出2項)等。
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    (填酶)切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入
     
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    (3)培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程
     
    (填序號)。過程②③采用的方法是
     
    。
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    發(fā)布:2024/12/20 2:30:1組卷:16引用:5難度:0.5
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    限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ
    識別序列及切割位點 G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG
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    發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
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