科學(xué)家通過(guò)基因工程技術(shù)，成功利用Bt毒蛋白基因和非轉(zhuǎn)基因棉A植株培育出抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因棉B植株，回答下列問(wèn)題：
（1）利用基因工程獲得抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因棉B植株的操作程序主要包括

四

四

個(gè)步驟，其中核心步驟是

構(gòu)建基因表達(dá)載體

構(gòu)建基因表達(dá)載體

。
（2）一個(gè)完整的基因表達(dá)載體應(yīng)該包括復(fù)制原點(diǎn)、啟動(dòng)子、終止子、

目的基因（Bt毒蛋白基因）和標(biāo)記基因

目的基因（Bt毒蛋白基因）和標(biāo)記基因

（答出2點(diǎn)即可）等，其中啟動(dòng)子是指

位于基因首端的一段特殊DNA序列，是RNA聚合酶識(shí)別及結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程

位于基因首端的一段特殊DNA序列，是RNA聚合酶識(shí)別及結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程

。
（3）研究人員發(fā)明了一種新的基因轉(zhuǎn)化法——農(nóng)桿菌介導(dǎo)噴花轉(zhuǎn)基因法，即將農(nóng)桿菌懸浮液用微型噴壺均勻噴灑于棉花柱頭和花藥等器官上，該方法集合了

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和花粉管通道法

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和花粉管通道法

兩種轉(zhuǎn)化法的優(yōu)點(diǎn)，可用

DNA分子雜交

DNA分子雜交

技術(shù)確認(rèn)Bt毒蛋白基因是否插入到了轉(zhuǎn)基因植物的染色體DNA上。
（4）通過(guò)對(duì)Bt毒蛋白三維結(jié)構(gòu)圖及氨基酸序列進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)若將該蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中-一段由14個(gè)氨基酸組成的螺旋結(jié)構(gòu)缺失，結(jié)構(gòu)變化后的Bt蛋白質(zhì)能使棉鈴蟲(chóng)具有更高的致死率。若要根據(jù)蛋白質(zhì)工程的原理設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)對(duì)Bt蛋白進(jìn)行改造，以提高其致死率，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路是

參照密碼子表，找到控制該14個(gè)氨基酸的堿基對(duì)序列所在的基因位置，將這些堿基對(duì)序列進(jìn)行缺失處理

參照密碼子表，找到控制該14個(gè)氨基酸的堿基對(duì)序列所在的基因位置，將這些堿基對(duì)序列進(jìn)行缺失處理

。