請回答下列關(guān)于基因工程的相關(guān)問題:
(1)在標(biāo)準(zhǔn)的PCR體系中需要加入 模板、原料、酶模板、原料、酶和 22種引物,引物的作用是 使Taq酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸使Taq酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸。
(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體時,需要用 DNA連接酶DNA連接酶將目的基因與載體連接,因此需要在目的基因兩側(cè)加上酶切位點(diǎn)。PCR完成以后,常采用 瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳來鑒定PCR的產(chǎn)物。
(3)用兩種酶切割目的基因和質(zhì)粒要優(yōu)于同種酶切割,其優(yōu)點(diǎn)是 可以保證目的基因和質(zhì)粒的正向連接,同時避免目的基因、質(zhì)粒發(fā)生自連成環(huán)可以保證目的基因和質(zhì)粒的正向連接,同時避免目的基因、質(zhì)粒發(fā)生自連成環(huán)。
(4)若要用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,應(yīng)選用下圖中的 DD作為表達(dá)載體(圖中→代表目的基因,箭頭方向代表轉(zhuǎn)錄方向;Bar基因是標(biāo)記基因),原因是 表達(dá)載體需要具備啟動子、終止子和標(biāo)記基因等元件,且需將目的基因正確插到T-DNA的啟動子和終止子之間表達(dá)載體需要具備啟動子、終止子和標(biāo)記基因等元件,且需將目的基因正確插到T-DNA的啟動子和終止子之間。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合.
【答案】模板、原料、酶;2;使Taq酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸;DNA連接酶;瓊脂糖凝膠電泳;可以保證目的基因和質(zhì)粒的正向連接,同時避免目的基因、質(zhì)粒發(fā)生自連成環(huán);D;表達(dá)載體需要具備啟動子、終止子和標(biāo)記基因等元件,且需將目的基因正確插到T-DNA的啟動子和終止子之間
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布:2024/6/17 8:0:9組卷:2引用:2難度:0.8
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(2)為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒,應(yīng)該選擇
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限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
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