苯丙酮尿癥是單基因遺傳病，科學(xué)家將正?；駾導(dǎo)入該病患者的細(xì)胞，以治療該病。圖甲為A、B、C三種質(zhì)粒，圖乙為含有目的基因D的DNA片段，圖丙為重組載體的示意圖。Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lacZ為藍(lán)色顯色基因，其表達(dá)產(chǎn)物可以將無(wú)色化合物X-gal轉(zhuǎn)化成藍(lán)色物質(zhì)，使菌落呈藍(lán)色、而非白色，EcoRI（0.6Kb）、PvuI（0.8Kb）為限制酶及其切割位點(diǎn)與復(fù)制原點(diǎn)之間的距離?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程操作的核心步驟是 基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建。圖甲中三種質(zhì)粒適宜作為運(yùn)載體的是質(zhì)粒 BB，與另外兩種質(zhì)粒相比，其作為載體的優(yōu)點(diǎn)是 有標(biāo)記基因，復(fù)制原點(diǎn)不會(huì)被限制酶切割有標(biāo)記基因，復(fù)制原點(diǎn)不會(huì)被限制酶切割。
（2）獲取目的基因D時(shí)應(yīng)選擇乙圖中的 PvuⅠPvuⅠ對(duì)其所在的DNA進(jìn)行切割。如果僅知道D基因首尾的部分核苷酸序列，根據(jù)D基因已知核苷酸序列合成 引物引物，利用PCR擴(kuò)增目的基因。
（3）將目的基因D和甲圖中相應(yīng)質(zhì)粒連接后，得到圖丙中三種方式。為選出正向連接的重組質(zhì)粒，使用 EcoRⅠEcoRⅠ對(duì)質(zhì)粒單酶切后，進(jìn)行電泳分析。若是正向連接載體，電泳圖譜中出現(xiàn)長(zhǎng)度為 1.21.2Kb和 5.55.5Kb兩條帶。
（4）利用自身不含lacZ基因且對(duì)抗生素敏感的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，要在已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒、已轉(zhuǎn)化的含空質(zhì)粒的受體細(xì)胞和未轉(zhuǎn)化成功的細(xì)胞中篩選出已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞的方法是：在含有 氨芐青霉素和X-gal氨芐青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，形成 白白色菌落的為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】基因表達(dá)載體的構(gòu)建；B；有標(biāo)記基因，復(fù)制原點(diǎn)不會(huì)被限制酶切割；PvuⅠ；引物；EcoRⅠ；1.2；5.5；氨芐青霉素和X-gal；白
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：33引用：1難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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