研究者篩選到一株降解纖維素能力較強(qiáng)的枯草芽孢桿菌菌株(B菌),從中獲得一種纖維素酶(C1酶)基因。將C1酶基因與高效表達(dá)載體(HT質(zhì)粒)連接,再導(dǎo)入B菌,以期獲得降解纖維素能力更強(qiáng)的工程菌。熒光定量PCR技術(shù)可定量檢測樣本中某種DNA含量。其原理是在PCR體系中每加入一對引物的同時加入一個與某條模板鏈互補(bǔ)的熒光探針,當(dāng)Taq酶催化子鏈延伸至探針處,會水解探針,使熒光監(jiān)測系統(tǒng)接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一次,就有一個熒光分子生成。在檢測過程中,隨著PCR的進(jìn)行,反應(yīng)產(chǎn)物不斷累積,“雜交雙鏈”熒光信號的強(qiáng)度也等比例增加??赏ㄟ^熒光強(qiáng)度的變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖(如圖1)。
注:DNA的轉(zhuǎn)錄方向是RNA的合成方向,即5'端到3'端。
回答下列問題:
(1)啟動子的基本組成單位是 脫氧核苷酸脫氧核苷酸,能識別啟動子的酶是 RNA聚合酶RNA聚合酶。
(2)熒光定量PCR儀能監(jiān)測出熒光到達(dá)預(yù)先設(shè)定閾值的循環(huán)數(shù)(Ct值),病毒核酸濃度越高,Ct值越 小小。
(3)“平臺期”出現(xiàn)的最可能的原因是 試劑盒中的原料、引物和探針數(shù)量一定,超出一定循環(huán)數(shù)后,熒光標(biāo)記的“雜交雙鏈”不再增加試劑盒中的原料、引物和探針數(shù)量一定,超出一定循環(huán)數(shù)后,熒光標(biāo)記的“雜交雙鏈”不再增加。
(4)圖2中HT質(zhì)粒酶切位點如圖所示,C1酶基因以B鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈,克隆C1酶基因時在其酶切位點1和酶切位點2兩端分別添加 BamHIBamHI和 SmaISmaI,并且二者順序不能調(diào)換的原因是 轉(zhuǎn)錄時mRNA自身延伸方向是5’→3’,使C1酶基因按照正確的方向與已被酶切的HT質(zhì)粒連接轉(zhuǎn)錄時mRNA自身延伸方向是5’→3’,使C1酶基因按照正確的方向與已被酶切的HT質(zhì)粒連接。
(5)預(yù)期該工程菌在處理廢棄物以保護(hù)環(huán)境方面可能的應(yīng)用 降解桔桿,減少桔桿燃燒帶來的空氣污染降解桔桿,減少桔桿燃燒帶來的空氣污染。(舉一例)
【考點】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定.
【答案】脫氧核苷酸;RNA聚合酶;小;試劑盒中的原料、引物和探針數(shù)量一定,超出一定循環(huán)數(shù)后,熒光標(biāo)記的“雜交雙鏈”不再增加;BamHI;SmaI;轉(zhuǎn)錄時mRNA自身延伸方向是5’→3’,使C1酶基因按照正確的方向與已被酶切的HT質(zhì)粒連接;降解桔桿,減少桔桿燃燒帶來的空氣污染
【解答】
【點評】
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限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識別序列及切割位點 T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
(2)過程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是
(3)若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳,請在答題紙相應(yīng)位置畫出可能得到的電泳條帶。
(4)科研中常用呤霉素對真核細(xì)胞進(jìn)行篩選,一般選擇最低致死濃度的前一個濃度作為篩選濃度的原因是:既可以讓大部分沒有抗性的細(xì)胞死亡又不會讓
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