蘇云金桿菌產(chǎn)生的Bt抗蟲蛋白具有良好的殺蟲效果，Bt基因也因此成為應(yīng)用最為廣泛的殺蟲基因。Bt基因位于蘇云金桿菌的質(zhì)粒A上，為了解Bt基因的序列信息首先要得到完整的Bt基因，科學(xué)家們進行了如下實驗?；卮鹣铝袉栴}：
（1）首先用限制酶HindⅢ處理質(zhì)粒A，得到多個DNA片段，分別與質(zhì)粒B連接，獲得重組DNA分子，并將這些重組DNA分子導(dǎo)入經(jīng) Ca2+Ca2+處理的大腸桿菌中，由此構(gòu)建了蘇云金桿菌的部分基因文庫。
（2）研究人員利用抗Bt抗蟲蛋白的抗體，進行 抗原—抗體雜交抗原—抗體雜交，并通過電泳檢測上述文庫中不同大腸桿菌菌株的Bt抗蟲蛋白基因的表達情況，結(jié)果如圖1所示。
根據(jù)電泳結(jié)果推測菌株3中僅插入了Bt基因的一部分序列，并非完整基因，研究人員作出這一推測的依據(jù)是 菌株3中Bt基因表達的蛋白質(zhì)的分子量小于Bt抗蟲蛋白的分子量菌株3中Bt基因表達的蛋白質(zhì)的分子量小于Bt抗蟲蛋白的分子量。對菌株3中插入的DNA片段序列進行測序（記為Bt-1序列），并根據(jù)序列制成了DNA探針X。
（3）為了獲得完整的Bt基因，研究人員又使用限制酶PstⅠ切割質(zhì)粒A，得到多個DNA片段。利用探針X通過DNA分子雜交方法可篩選出其中含有Bt基因序列的DNA片段，對其進行測序（記為Bt-2序列）。如圖2所示，為了將Bt-1和Bt-2兩段DNA分子連接起來，研究人員單獨使用 HindⅢ或PstⅠHindⅢ或PstⅠ和DNA連接酶處理兩段序列，獲得的重組DNA分子記為Bt-3。
（4）為了進一步驗證Bt-3中包含完整的Bt基因，請寫出簡要的實驗步驟和檢測指標(biāo) 將Bt-3與質(zhì)粒B連接構(gòu)建重組DNA后，導(dǎo)入大腸桿菌，用抗Bt抗蟲蛋白的抗體進行抗原—抗體雜交，并通過電泳檢測該大腸桿菌菌株的Bt抗蟲蛋白基因的表達情況將Bt-3與質(zhì)粒B連接構(gòu)建重組DNA后，導(dǎo)入大腸桿菌，用抗Bt抗蟲蛋白的抗體進行抗原—抗體雜交，并通過電泳檢測該大腸桿菌菌株的Bt抗蟲蛋白基因的表達情況。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】Ca2+；抗原—抗體雜交；菌株3中Bt基因表達的蛋白質(zhì)的分子量小于Bt抗蟲蛋白的分子量；HindⅢ或PstⅠ；將Bt-3與質(zhì)粒B連接構(gòu)建重組DNA后，導(dǎo)入大腸桿菌，用抗Bt抗蟲蛋白的抗體進行抗原—抗體雜交，并通過電泳檢測該大腸桿菌菌株的Bt抗蟲蛋白基因的表達情況
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：2引用：2難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
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