某研究性學(xué)習(xí)小組利用熒光素-熒光素酶生物發(fā)光法,測定人參愈傷組織中ATP的含量,以研究人參細(xì)胞能量代謝的特點(diǎn).
實(shí)驗(yàn)原理:熒光素在熒光素酶、ATP等物質(zhì)參與下,進(jìn)行反應(yīng)發(fā)出熒光;用分光光度計(jì)可測定發(fā)光強(qiáng)度;當(dāng)熒光素和熒光素酶都足量時(shí),在一定范圍內(nèi),ATP的含量與發(fā)光強(qiáng)度成正比.
實(shí)驗(yàn)步驟:
一、ATP的提?。悍Q取一定量的人參愈傷組織,研磨后沸水浴10min,冷卻至室溫,離心,取上清液.
二、ATP的測定:吸取一定量的上清液,放入分光光度計(jì)反應(yīng)室內(nèi),并注入適量的所需物質(zhì),在有氧等適宜條件下進(jìn)行反應(yīng),記錄發(fā)光強(qiáng)度并計(jì)算ATP含量.
請(qǐng)回答下列問題.
(1)步驟一中的沸水浴處理,使酶的空間結(jié)構(gòu)空間結(jié)構(gòu)被破壞而失活.
(2)步驟二注入的物質(zhì)中,屬于反應(yīng)物的是熒光素熒光素;分光光度計(jì)反應(yīng)室內(nèi)能量形式的轉(zhuǎn)換是化學(xué)能轉(zhuǎn)換為光能(和熱能)化學(xué)能轉(zhuǎn)換為光能(和熱能).
(3)熒光素酶價(jià)格昂貴,為能準(zhǔn)確測定出ATP的含量,又能節(jié)省酶的用量,學(xué)習(xí)小組探究了“測定ATP時(shí)所需熒光素酶溶液的最佳濃度”,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖.
①學(xué)習(xí)小組配制了1×10-8 mol/L ATP標(biāo)準(zhǔn)液、70mg/L熒光素溶液(過量)和濃度分別為0、10、20、30、40、50、60、70mg/L熒光素酶濃度分別為0、10、20、30、40、50、60、70mg/L熒光素酶溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn).
②結(jié)果表明:圖中ee點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的熒光素酶濃度為最佳濃度.e、f、g點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的熒光素酶濃度不同,但發(fā)光強(qiáng)度相同,這是因?yàn)?!--BA-->ATP全部水解(或ATP數(shù)量限制)ATP全部水解(或ATP數(shù)量限制).
(4)ATP測定對(duì)食品衛(wèi)生監(jiān)控有重要意義.食品衛(wèi)生檢驗(yàn)人員利用上述生物發(fā)光法測定某熟食品樣品中細(xì)菌的ATP總含量,測算出了細(xì)菌的數(shù)量,從而判斷食品污染程度.做出上述判斷的理由是:每個(gè)細(xì)菌細(xì)胞中ATP的含量大致相同(且相對(duì)穩(wěn)定)大致相同(且相對(duì)穩(wěn)定).
【考點(diǎn)】ATP在生命活動(dòng)中的作用和意義.
【答案】空間結(jié)構(gòu);熒光素;化學(xué)能轉(zhuǎn)換為光能(和熱能);濃度分別為0、10、20、30、40、50、60、70mg/L熒光素酶;e;ATP全部水解(或ATP數(shù)量限制);大致相同(且相對(duì)穩(wěn)定)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:26引用:4難度:0.5