qRT-PCR又稱實(shí)時(shí)熒光定量PCR,是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中,以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)定每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)循環(huán)后產(chǎn)物的總量,間接對(duì)待測(cè)樣品中特定DNA序列進(jìn)行定量分析的方法。qRT-PCR實(shí)驗(yàn)步驟:反轉(zhuǎn)錄→擴(kuò)增→檢測(cè)。qRT-PCR目前主要應(yīng)用于基因表達(dá)水平的檢測(cè)。請(qǐng)回答下列有關(guān)問題:
(1)反轉(zhuǎn)錄:在逆轉(zhuǎn)錄(或反轉(zhuǎn)錄)逆轉(zhuǎn)錄(或反轉(zhuǎn)錄)酶的作用下,mRNA反轉(zhuǎn)錄形成cDNA分子;cDNA與原基因相比,在結(jié)構(gòu)上的不同點(diǎn)有cDNA中不具有啟動(dòng)子和終止子等調(diào)控因子cDNA中不具有啟動(dòng)子和終止子等調(diào)控因子。
(2)擴(kuò)增:用PCR擴(kuò)增cDNA,首先要制備22種引物,以便為熱穩(wěn)定DNA聚合(或Taq)熱穩(wěn)定DNA聚合(或Taq)酶提供結(jié)合位點(diǎn),并從引物的3′3′(填“5′”或“3′”)端開始拼接單個(gè)的脫氧核苷酸。
(3)檢測(cè):利用熒光標(biāo)記的化學(xué)物質(zhì)是4種脫氧核苷酸(或dNTP)4種脫氧核苷酸(或dNTP),隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。
(4)qRT-PCR對(duì)基因表達(dá)的檢測(cè)僅限于轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄水平,而對(duì)于翻譯水平的檢測(cè)常用的方法是抗原一抗體雜交實(shí)驗(yàn)抗原一抗體雜交實(shí)驗(yàn)。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定.
【答案】逆轉(zhuǎn)錄(或反轉(zhuǎn)錄);cDNA中不具有啟動(dòng)子和終止子等調(diào)控因子;2;熱穩(wěn)定DNA聚合(或Taq);3′;4種脫氧核苷酸(或dNTP);轉(zhuǎn)錄;抗原一抗體雜交實(shí)驗(yàn)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:11引用:1難度:0.7
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1.數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù),其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是( ?。?img alt src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布:2024/12/30 23:30:2組卷:6引用:2難度:0.6 -
2.科學(xué)家為了提高光合作用過程中Rubiaco酶對(duì)CO2的親和力,利用PCR定點(diǎn)突變技術(shù)改造Rubisco酶基因,從而顯著提高了植物的光合作用速率。請(qǐng)回答下列問題:
(1)PCR定點(diǎn)突變技術(shù)屬于
(2)PCR過程所依據(jù)的原理是
(3)目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為
(4)另有一些科學(xué)家利用生物技術(shù)將人的生長(zhǎng)激素基因?qū)胄∈笫芫训募?xì)胞核中,經(jīng)培育獲得一種轉(zhuǎn)基因小鼠,其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長(zhǎng)激素并分泌到尿液中。有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是
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3.下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說法錯(cuò)誤的是( ?。?/h2>
發(fā)布:2024/12/30 23:30:2組卷:3引用:3難度:0.7
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