黑胸大蠊是一種生活在我國南方地區(qū)的主要衛(wèi)生害蟲，通過生物防治手段可以起到一定抑制蟲害的作用。某研究小組對黑胸大蠊?jié)夂瞬《镜腜fDNV基因與pUCl19質(zhì)粒進行重組構(gòu)建，通過感染黑胸大蠊研究其病理特征，已知KpnⅠ、PstⅠ、HindⅢ3種限制酶的酶切位點不同，Amp為氨芐青霉素抗性基因，實驗過程圖解如下。請分析回答下列問題：
（1）純化后的PfDNV基因可通過PCRPCR技術(shù)擴增。常將PfDNV基因與pUC119 質(zhì)粒采取加G-C尾的連接方式構(gòu)建重組質(zhì)粒，該加尾的連接方式能使重組質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性提高提高。
（2）研究小組將獲得的重組質(zhì)粒通過感受態(tài)轉(zhuǎn)化感受態(tài)轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)染大腸桿菌，在含有氨芐青霉素氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后，挑選出部分菌株，用HindⅢ酶解菌株中的重組質(zhì)粒，經(jīng)電泳分析后發(fā)現(xiàn)有些菌株顯示有5kb和3.7kb片段，還有些菌株顯示有1.8kb和6.9kb片段，出現(xiàn)這種情況的原因是基因和質(zhì)粒的正向和反向連接基因和質(zhì)粒的正向和反向連接。
（3）選擇可以正常表達的重組質(zhì)粒PfDNV-pUCl19，利用KpnⅠ酶酶解后回收7.3kb的片段，通過DNA連接酶DNA連接酶的作用獲得Pf△Kpn-pUC119重組質(zhì)粒，將兩種重組質(zhì)粒通過腹部注射法注入黑胸大蠊幼蟲體內(nèi)，所得的結(jié)果如下表所示。
質(zhì)粒轉(zhuǎn)染黑胸大蠊實驗結(jié)果
| 接種物 | 接種蟲數(shù) | 感染蟲數(shù) | 感染百分數(shù)（%） |
| Pf△Kpn-pUC119 | |||
| （2500ng） | 20 | 20 | 100 |
| （1250ng） | 20 | 1S | 90 |
| （250ng） | 20 | 17 | 85 |
| PfAKpn-pUC119 | |||
| （2300ng） | 20 | 0 | 0 |
| （1000ng） | 20 | 0 | 0 |
| 野生型病毒 | 20 | 20 | 100 |
| 未接種 | 20 | 0 | 0 |
2500
2500
ng及以上時，蟲體最終死亡率與野生型病毒感染的結(jié)果-致。Pf△Kpn-pUC119重組質(zhì)粒注射幼蟲后沒有感染的根本原因是：KpnⅠ酶酶解后再連接，導(dǎo)致PfDNV基因缺失了部分片段
PfDNV基因缺失了部分片段
。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】PCR；提高；感受態(tài)轉(zhuǎn)化；氨芐青霉素；基因和質(zhì)粒的正向和反向連接；DNA連接酶；2500；PfDNV基因缺失了部分片段
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：1引用：2難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7