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β-胡蘿卜素可在人體內(nèi)轉(zhuǎn)化為維生素A.普通水稻胚乳細(xì)胞中不含β-胡蘿卜素,科研人員利用基因工程技術(shù)培育富含β-胡蘿卜素的第一代“黃金大米”。
(1)培育第一代“黃金大米”時(shí),需要將八氫番茄紅素合成酶(psy)基因和胡蘿卜素脫飽和酶(crtⅠ)基因轉(zhuǎn)入普通水稻,圖1示所需構(gòu)建的重組Ti質(zhì)粒中的重組T-DNA片段。
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①要粗提取含psy基因、crtⅠ基因的DNA時(shí),利用了DNA分子的
不溶于酒精、在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同
不溶于酒精、在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同
物理性質(zhì)。
②利用PCR擴(kuò)增psy基因、crtⅠ基因時(shí),需要通過控制
溫度
溫度
的方法使DNA復(fù)制在體外反復(fù)進(jìn)行。常采用
瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳
來鑒定PCR產(chǎn)物。
③據(jù)圖分析,構(gòu)建重組T-DNA片段時(shí),依次用限制酶
I-SecⅠ、KpnⅠ
I-SecⅠ、KpnⅠ
和DNA連接酶處理,將psy基因和crtⅠ基因、潮霉素抗性基因接入。
④通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,上述重組Ti質(zhì)粒可以將該T-DNA片段導(dǎo)入水稻細(xì)胞并
整合到染色體DNA上
整合到染色體DNA上
。農(nóng)桿菌純化培養(yǎng),常用
平板劃線和稀釋涂布平板
平板劃線和稀釋涂布平板
方法將單個(gè)農(nóng)桿菌分散在固體培養(yǎng)基上。
(2)已知潮霉素對原核細(xì)胞和真核細(xì)胞的生長都有抑制作用,據(jù)此分析重組T-DNA片段中接入潮霉素抗性基因的作用是
篩選轉(zhuǎn)入重組T-DNA的農(nóng)桿菌和含重組T-DNA的水稻
篩選轉(zhuǎn)入重組T-DNA的農(nóng)桿菌和含重組T-DNA的水稻
。
(3)重組T-DNA片段中啟動子
2
2
是水稻種子的胚乳細(xì)胞特異性表達(dá)的啟動子。
(4)如圖2示第一代“黃金大米”中細(xì)胞內(nèi)β-胡蘿卜素的合成途徑。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)其細(xì)胞內(nèi)β-胡蘿卜素含量不夠高,是八氫番茄紅素含量較低造成的。據(jù)此信息可采取
對psy基因進(jìn)行誘變或定向改造(從其他生物中篩選),獲得表達(dá)產(chǎn)物活性更高的psy基因,進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作
對psy基因進(jìn)行誘變或定向改造(從其他生物中篩選),獲得表達(dá)產(chǎn)物活性更高的psy基因,進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作
措施,以便獲得β-胡蘿卜素含量更高的第二代“黃金大米”。

【答案】不溶于酒精、在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同;溫度;瓊脂糖凝膠電泳;I-SecⅠ、KpnⅠ;整合到染色體DNA上;平板劃線和稀釋涂布平板;篩選轉(zhuǎn)入重組T-DNA的農(nóng)桿菌和含重組T-DNA的水稻;2;對psy基因進(jìn)行誘變或定向改造(從其他生物中篩選),獲得表達(dá)產(chǎn)物活性更高的psy基因,進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布:2024/6/20 8:0:9組卷:5引用:2難度:0.8
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    發(fā)布:2024/12/20 5:0:2組卷:35引用:5難度:0.6
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    (1)獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有
     
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    (2)為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒,應(yīng)該選擇
     
    (填酶)切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入
     
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    。
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    。

    發(fā)布:2024/12/20 2:30:1組卷:16引用:5難度:0.5
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    識別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG
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    發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
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