基因檢測是指通過檢測生物體中的DNA序列，以了解生物體基因狀況的技術(shù)手段。Sanger雙脫氧鏈終止法是DNA測序的基本方法，其原理是：核酸模板在核酸聚合酶、帶有3′-OH末端的單鏈核苷酸引物、四種dNTP存在的條件下復制或轉(zhuǎn)錄時，如果在反應系統(tǒng)中分別引入單一種類的ddNTP（即2、3雙脫氧核苷三磷酸，在脫氧核糖的3′位置缺少一個羥基，故不能同后續(xù)的dNTP形成磷酸二酯鍵），只要ddNTP摻入鏈端，該鏈就停止延長，鏈端摻入dNTP的片段可繼續(xù)延長。通過電泳將不同長度的片段分開，DNA片段越小，距離起點越遠，根據(jù)末端核苷酸可得到原始序列信息。具體流程圖如圖1。
（1）若待測核酸模板為雙鏈DNA，首先要作 變性變性處理，與引物結(jié)合后，在DNA聚合酶作用下子鏈沿 從5′端向3′端從5′端向3′端方向（填“5′端向3′端”或“3′端向5′端”）進行延伸反應。若待測核酸模板為RNA，則需要在 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄酶的幫助下合成DNA單鏈片段。
（2）ddNTP為2，3-雙脫氧核苷三磷酸，只要ddNTP摻入鏈端，該鏈就停止延長的原因是 3號碳上不是羥基，不能與下一個脫氧核苷酸的磷酸形成磷酸二酯鍵3號碳上不是羥基，不能與下一個脫氧核苷酸的磷酸形成磷酸二酯鍵。
（3）假設(shè)某反應體系中，待測DNA單鏈序列3′GTACCGTA5′，加入4種dNTP和ddATP，經(jīng)過雙脫氧鏈終止法處理，會得到 33種片段，其中最短的片段序列是 CddACddA。
（4）假設(shè)某次Sanger雙脫氧鏈終止法測序得到的電泳圖如圖2所示，則待測DNA序列從5′端到3′端為 ACTACTGGTAACTACTGGTA。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定；目的基因的篩選與獲取．
【答案】變性；從5′端向3′端；逆轉(zhuǎn)錄；3號碳上不是羥基，不能與下一個脫氧核苷酸的磷酸形成磷酸二酯鍵；3；CddA；ACTACTGGTA
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：51引用：1難度：0.7
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="http://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴增目的基因，還可用于定點誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計引物，得到兩個常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計突變上游引物，突變位點位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進行第一次PCR反應得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個常規(guī)上游引物進行第二次PCR擴增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PCR擴增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該PCR擴增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過次復制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點是。
（3）如果要利用微生物進一步克隆PCR定點誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達載體導入馬鈴薯細胞，將馬鈴薯細胞培養(yǎng)成幼苗時經(jīng)過的兩個過程是。檢測目的基因是否在馬鈴薯細胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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