重組蛋白疫苗相當于把病毒最有效的抗原成分的基因整合到酵母菌、大腸桿菌等微生物細胞或某些特定動物細胞內,然后在體外大量培養(yǎng),表達出病毒的特定蛋白,再收獲、提純該特定蛋白,最后制成疫苗。如圖為Real-timePCR過程圖,當熒光物質(F)游離出來才能發(fā)出熒光,通過檢測反應體系中的熒光強度,可以達到檢測 PCR產物擴增量的目的。(注:聚合酶能催化磷酸二酯鍵的生成和斷裂。)請回答下列問題:
(1)基因工程中獲取目的基因的方法除從相關的已知結構和功能清晰的基因中進行篩選外,常用方法還有 人工合成目的基因人工合成目的基因和利用PCR技術擴增。
(2)上述 Real-time PCR反應過程中,使用的材料包括 耐高溫的DNA聚合酶(或Taq酶)、四種脫氧核苷酸、DNA模板耐高溫的DNA聚合酶(或Taq酶)、四種脫氧核苷酸、DNA模板(答出兩點即可)、合適的緩沖液,引物以及探針?;旌虾玫腜CR反應體系,在熱循環(huán)儀中進行由 變性、復性和延伸變性、復性和延伸組成的多次循環(huán)過程,即可進行DNA的大量擴增。
(3)探針完整時,熒光物質(F)所發(fā)出的熒光會被猝滅物質(Q)吸收,經(jīng)過第1、2步引物和探針均與模板鏈結合,請仔細觀察上圖的第2、3步,解釋通過檢測反應體系中的熒光強度,可以達到檢測PCR產物擴增量目的的原因是 當探針完整時,熒光物質(F)受到猝滅物質(Q)的制約不能發(fā)出熒光,當探針被聚合酶分解后,熒光物質游離出來,發(fā)出熒光信號,代表一條子鏈的產生,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光信號形成,所以可以通過檢測反應體系中的熒光強度,達到檢測PCR產物擴增量的目的當探針完整時,熒光物質(F)受到猝滅物質(Q)的制約不能發(fā)出熒光,當探針被聚合酶分解后,熒光物質游離出來,發(fā)出熒光信號,代表一條子鏈的產生,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光信號形成,所以可以通過檢測反應體系中的熒光強度,達到檢測PCR產物擴增量的目的。
(4)質粒作為基因工程常用的載體工具,應具備的基本條件有 有一個至多個限制酶切割位點;在受體細胞中能自我復制;含有特殊的標記基因等有一個至多個限制酶切割位點;在受體細胞中能自我復制;含有特殊的標記基因等(答出兩點即可),而作為基因表達載體,除滿足上述基本條件外,還需具有 啟動子和終止子啟動子和終止子,若受體細胞為動物細胞,則動物細胞培養(yǎng)的氣體條件是 95%空氣+5%CO2的混合氣體95%空氣+5%CO2的混合氣體。
【答案】人工合成目的基因;耐高溫的DNA聚合酶(或Taq酶)、四種脫氧核苷酸、DNA模板;變性、復性和延伸;當探針完整時,熒光物質(F)受到猝滅物質(Q)的制約不能發(fā)出熒光,當探針被聚合酶分解后,熒光物質游離出來,發(fā)出熒光信號,代表一條子鏈的產生,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光信號形成,所以可以通過檢測反應體系中的熒光強度,達到檢測PCR產物擴增量的目的;有一個至多個限制酶切割位點;在受體細胞中能自我復制;含有特殊的標記基因等;啟動子和終止子;95%空氣+5%CO2的混合氣體
【解答】
【點評】
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