心腦血管疾病引發(fā)的血栓并發(fā)癥嚴重威脅人類生命，居各種疾病死亡率首位。臨床上常用組織型纖溶酶原激活劑作為溶解血栓、搶救心肌梗死患者的特效藥。然而，t-PA因注射劑量大容易誘發(fā)顱內(nèi)出血，為了提高t-PA臨床應(yīng)用的可行性，科學(xué)家研發(fā)了一種顱內(nèi)出血傾向大幅度降低的優(yōu)質(zhì)t-PA突變蛋白。據(jù)此回答下列問題：
（1）人t-PA由527個氨基酸構(gòu)成（如下圖所示），基礎(chǔ)研究顯示，將t-PA第84位的半胱氨酸替換為絲氨酸，所形成的突變蛋白溶解血栓有效性明顯提高。對t-PA的改造必須通過 基因修飾（或基因合成）基因修飾（或基因合成）獲得t-PA突變基因而不是直接改造蛋白質(zhì)。
（2）t-PA突變基因最終需要與P質(zhì)粒重組才能構(gòu)建基因表達載體。P質(zhì)粒DNA分子上有①復(fù)制原點，可以保證B質(zhì)粒在受體細胞中能 自我復(fù)制自我復(fù)制；②多個限制酶切位點，便于 目的基因（外源DNA）的插入目的基因（外源DNA）的插入；③標(biāo)記基因和相關(guān)的啟動子。
（3）基因表達載體進入受體細胞中并在細胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程稱為 轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化。
（4）為檢測t-PA基因是否導(dǎo)入受體細胞，可采用 DNA分子雜交DNA分子雜交進行檢測。除此之外，還可以使用PCR技術(shù)，實驗組以待測樣本DNA為模板，使用引物1：5′-TACCAAGTGATCTGCAGA-3′、引物2：5’-TCGCATGTTGTGACGAAT-3’5’-TCGCATGTTGTGACGAAT-3’（填引物的核苷酸序列）進行PCR擴增；同時以 以t-PA突變基因片段為模板以t-PA突變基因片段為模板模板的組別作為陰性對照組。若 實驗組與陽性對照組的結(jié)果一致，且陰性對照組無擴增產(chǎn)物實驗組與陽性對照組的結(jié)果一致，且陰性對照組無擴增產(chǎn)物，說明目的基因?qū)氤晒Α?/h1>
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】基因修飾（或基因合成）；自我復(fù)制；目的基因（外源DNA）的插入；轉(zhuǎn)化；DNA分子雜交；5’-TCGCATGTTGTGACGAAT-3’；以t-PA突變基因片段為模板；實驗組與陽性對照組的結(jié)果一致，且陰性對照組無擴增產(chǎn)物
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：6引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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