色鹽桿菌DSM22428T是從演海鹽地的堿蓬中分離到的種嗜鹽菌。研究證實(shí)，該菌株在高鹽條件下，可通過(guò)在細(xì)胞內(nèi)積累滲透保護(hù)劑——甘氨酸甜菜堿（其合成與甜菜堿醛脫氫酶密切相關(guān)）來(lái)抵抗外界的滲透脅迫。在不同濃度梯度的NaCl基本培養(yǎng)基中添加濃度為1 mM的膽堿，接種色鹽桿菌DSM22428T。和對(duì)照組相比。在鹽脅迫條件下，外界提供一定濃度的膽堿，可以明顯提高色鹽桿菌DSM22428T的耐鹽能力，說(shuō)明色鹽桿菌DSM22428T甜菜堿醛脫氫酶具有明顯的調(diào)節(jié)滲透壓功能。科研人員根據(jù)已獲得的一段甜菜堿醛脫氫酶基因（betB）的堿基序列，設(shè)計(jì)了一對(duì)帶有酶切位點(diǎn)的上、下游引物，先以色鹽桿菌DSM22428T的總DNA為模板擴(kuò)增獲得betB基因的全序列，經(jīng)雙酶切（限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)如下表）后連接到表達(dá)載體質(zhì)粒pET-15b上，再轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21（DE3）內(nèi)，最終獲得重組大腸桿菌。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
引物設(shè)計(jì)如下：
上游引物：5'ATAGGATCCATGAGCGTTTTCGAGACTC 3'
下游引物：5'ATACTCGAGTTAGAACGCGGATTCGAAC 3'

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	XhoⅠ	XbaⅠ
識(shí)別序列	5'-G↓GATCC-3'	5'-A↓AGCTT-3'	5'-C↓TCGAG-3'	5'-T↓CTAGA-3'

（1）以色鹽桿菌DSM22428T的總DNA為模板擴(kuò)增獲得betB基因的全序列。為保證betB基因正確插入到表達(dá)載體質(zhì)粒pET-15b上，可選擇

BamHI

BamHI

和 

Xho I

Xho I

限制酶切割得到該基因，再通過(guò)

DNA 連接

DNA 連接

酶形成重組表達(dá)載體。
（2）將含有betB基因的表達(dá)載體質(zhì)粒DET 15b導(dǎo)入大腸桿菌采用的方法是

感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化法

感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化法

，該表達(dá)載體中標(biāo)記基因的作用是

將含有betB（目的）基因的細(xì)胞篩選出來(lái)

將含有betB（目的）基因的細(xì)胞篩選出來(lái)

。
（3）重組大腸桿菌的變異類型屬于

基因重組

基因重組

。重組表達(dá)載體質(zhì)粒pET-15b是否能正確表達(dá)甜菜堿醛脫氫酶，可以采用分子水平上的

抗原—抗體雜交

抗原—抗體雜交

技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。
（4）為了進(jìn)一步驗(yàn)證異源表達(dá)的甜菜堿醛脫氫酶是否具有調(diào)節(jié)滲透壓的功能，在不同濃度梯度的NaCl培養(yǎng)基中添加濃度為1mM的膽堿，再接種

重組大腸桿菌

重組大腸桿菌

，用IPTG（誘導(dǎo)劑）誘導(dǎo)表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，

重組大腸桿菌的存活率和生長(zhǎng)速度

重組大腸桿菌的存活率和生長(zhǎng)速度

 高于帶空質(zhì)粒的對(duì)照組，尤其在高鹽條件下效果更加明顯，可見(jiàn)色鹽桿菌DSM22428TbetB基因的導(dǎo)入顯著提高了重組大腸桿菌的耐鹽性，說(shuō)明異源表達(dá)的甜菜堿醛脫氫酶同樣具有調(diào)節(jié)滲透壓的功能。