為使水稻獲得抗除草劑性狀，科研人員將除草劑草甘膦抗性基因轉(zhuǎn)入水稻植株，獲得抗草甘膦轉(zhuǎn)基因水稻。回答下列問題：
（1）將草甘膦抗性基因作為

目的基因

目的基因

，與Ti質(zhì)粒用相同的

限制性核酸內(nèi)切酶

限制性核酸內(nèi)切酶

和DNA連接酶處理構(gòu)建基因表達載體。
（2）用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理農(nóng)桿菌，將其與基因表達載體混合完成轉(zhuǎn)化后，在添加

潮霉素

潮霉素

的培養(yǎng)基中，經(jīng)篩選1得到含目的基因表達載體的農(nóng)桿菌。
（3）（不定項）利用PCR技術(shù)，可以鑒定被侵染的愈傷組織中是否含有草甘膦抗性基因。草甘膦抗性基因的部分序列如下：
5′-ATGGCT…………AGGAAC-3′
3′-TACCGA…………TCCTTG-5′
根據(jù)上述序列應(yīng)選擇引物

BD

BD

（填字母）進行PCR。
A．引物：5′-TACCGA-3′B．引物：5′-GTTCCT-3′
C．引物：5′-AUGGCU-3′D．引物：5′-ATGGCT-3′
（4）PCR擴增時需要根據(jù)草甘膦抗性基因序列設(shè)計

2

2

種引物，其原因是

保證基因的兩條反向平行的鏈都作模板

保證基因的兩條反向平行的鏈都作模板

。
（5）除了鑒定愈傷組織中是否含有目的基因以外，還可以利用

抗原—抗體雜交

抗原—抗體雜交

方法來鑒定草甘膦抗性基因的表達產(chǎn)物，從而進行圖中的篩選2。兩次篩選后得到的轉(zhuǎn)基因愈傷組織經(jīng)過細胞的

再分化

再分化

過程，獲得轉(zhuǎn)基因水稻。