B基因存在于水稻基因組中,僅在體細(xì)胞(2n)和精子中正常表達(dá),在卵細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄。為研究B基因表達(dá)對(duì)卵細(xì)胞的影響,設(shè)計(jì)了如下圖所示的實(shí)驗(yàn)來(lái)獲取能夠在卵細(xì)胞中表達(dá)B基因的轉(zhuǎn)基因植株。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問題:
(1)從水稻體細(xì)胞中提取總RNA,在 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下構(gòu)建 cDNAcDNA文庫(kù),進(jìn)而獲得B基因編碼蛋白的序列。Luc基因是熒光素酶基因,能催化熒光素產(chǎn)生熒光。B-Luc融合基因形成過(guò)程中需要的酶是 限制酶和DNA連接酶限制酶和DNA連接酶。
(2)融合基因必須連接到啟動(dòng)子和終止子之間,其中啟動(dòng)子是 RNA聚合酶RNA聚合酶的結(jié)合位點(diǎn)。圖中卡那霉素抗性基因的作用是 作為標(biāo)記基因,檢測(cè)B-Luc融合基因是否導(dǎo)入農(nóng)桿菌細(xì)胞作為標(biāo)記基因,檢測(cè)B-Luc融合基因是否導(dǎo)入農(nóng)桿菌細(xì)胞。
(3)過(guò)程①最常用的方法是 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法;若借助Luc基因的表達(dá)產(chǎn)物來(lái)完成圖中第二次鑒定篩選,則具體方法是 檢測(cè)加入熒光素的細(xì)胞中是否發(fā)出熒光檢測(cè)加入熒光素的細(xì)胞中是否發(fā)出熒光。
(4)從轉(zhuǎn)基因水稻植株未成熟種子中分離出胚,觀察到細(xì)胞內(nèi)僅含一個(gè)染色體組,判定該胚是由未受精的卵細(xì)胞發(fā)育形成的,而一般情況下水稻卵細(xì)胞在未受精時(shí)不進(jìn)行發(fā)育,由此表明 B基因表達(dá)能使卵細(xì)胞不經(jīng)受精直接發(fā)育成胚B基因表達(dá)能使卵細(xì)胞不經(jīng)受精直接發(fā)育成胚。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】逆轉(zhuǎn)錄;cDNA;限制酶和DNA連接酶;RNA聚合酶;作為標(biāo)記基因,檢測(cè)B-Luc融合基因是否導(dǎo)入農(nóng)桿菌細(xì)胞;農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法;檢測(cè)加入熒光素的細(xì)胞中是否發(fā)出熒光;B基因表達(dá)能使卵細(xì)胞不經(jīng)受精直接發(fā)育成胚
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:3引用:2難度:0.7
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