病毒侵染植物細胞后進行增殖，植物利用基因沉默機制抑制病毒的增殖。但多數(shù)病毒自身可編碼抑制子以打破植物的基因沉默防衛(wèi)反應。根據(jù)基因沉默原理，科研人員獲得了使黃瓜花葉病毒相關基因沉默的轉(zhuǎn)基因煙草。請回答下列相關問題：
（1）黃瓜花葉病毒（CMV）的遺傳物質(zhì)為RNA，可編碼B蛋白打破植物對病毒的基因沉默。
①提取CMV的總RNA，通過

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

獲得cDNA，設計與

與B基因上下游堿基互補配對

與B基因上下游堿基互補配對

的引物，通過

PCR

PCR

擴增B基因。
②用

限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接

限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接

酶將B基因反向接入Ti質(zhì)粒，構建表達載體。利用

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

法將其導入受體細胞，獲得T₀代B基因沉默的轉(zhuǎn)基因煙草植株。對T₀代株系B基因進行DNA檢測，電泳結果如圖1所示：

根據(jù)圖示結果判斷

1、2、3、4、5

1、2、3、4、5

個體為轉(zhuǎn)（B）基因煙草。
③轉(zhuǎn)基因煙草的抗病性檢測：將

黃瓜花葉病毒

黃瓜花葉病毒

接種于T₀代轉(zhuǎn)基因植株，以葉片病斑的程度作為抗病參數(shù)，發(fā)現(xiàn)抗病植株：感病植株約為2：3。
（2）研究人員進一步檢測了不同株系的病毒含量，結果如表所示：
T₀代轉(zhuǎn)基因煙草植株接種CMV后的T_as-ELSA檢測（OD₄₀₅）

株系	轉(zhuǎn)基因抗病煙株	轉(zhuǎn)基因感病煙株	CK+	CK-
A	0.102	0.372	0.428	0.096
B	0.132	0.461	0.521	0.114
C	0.119	0.362	0.47	60.092
D	0.124	0.407	0.384	0.107
E	0.107	0.352	0.406	0.116
平均值	0.117	0.391	0.443	0.105

注：CK⁺：野生型接種；CK^-：野生型不接種；OD₄₀₅：光密度，代表病毒相對量。
①依據(jù)表中數(shù)據(jù)分析，T₀代植株出現(xiàn)抗病性狀的原因

抑制病毒的增殖

抑制病毒的增殖

。
②對T₀代轉(zhuǎn)基因抗病煙株進一步研究發(fā)現(xiàn)：反向?qū)氲腂基因在宿主細胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄合成小分子雙鏈RNA（dsRNA），被宿主細胞識別并啟動一系列同源RNA降解程序，過程如圖2所示：請分析T₀代陽性植株出現(xiàn)抗病性狀的分子機理：

T0代陽性植株的B基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物dsRNA在核酶作用下降解（產(chǎn)生siRNA），單鏈siRNA與RISC復合體結合，因為siRNA能與病毒RNA堿基互補配對（B基因與病毒RNA具有同源性），RISC復合體催化病毒RNA水解，從而表現(xiàn)出病毒抗性

T0代陽性植株的B基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物dsRNA在核酶作用下降解（產(chǎn)生siRNA），單鏈siRNA與RISC復合體結合，因為siRNA能與病毒RNA堿基互補配對（B基因與病毒RNA具有同源性），RISC復合體催化病毒RNA水解，從而表現(xiàn)出病毒抗性

。

（3）黃瓜花葉病毒（CMV）與宿主細胞在基因表達過程中出現(xiàn)的“植物沉默防衛(wèi)反應”與病毒“基因沉默的抑制”的現(xiàn)象，從進化的角度分析，體現(xiàn)了CMV病毒與宿主植物間的

協(xié)同進化

協(xié)同進化

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