轉(zhuǎn)座子是指能從基因組的一個位置移動到另一個位置的DNA片段。Ac片段能編碼轉(zhuǎn)座酶可自主移動。Ds片段需在轉(zhuǎn)座酶作用下,才可以從原來的位置上切離下來,然后隨機插入到所在染色體的其他位置或其他染色體上。
(1)用限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶將DS片段構(gòu)建在Ti質(zhì)粒的T-DNA片段上,再用含有該重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻,自交篩選獲得DS-T-DNA純合體(甲)。以同樣方法獲得Ac-T-DNA純合體水稻(乙)。甲、乙雜交獲得Ac/Ds雙因子轉(zhuǎn)座系統(tǒng)水稻,在其后代中篩選到一些淡綠葉突變體。利用淡綠葉突變體與野生型水稻(甲)進行系列雜交實驗,F2F2代獲得野生型和淡綠葉水稻植株分別為442株和130株,分離比符合3:1,初步推測淡綠葉突變是單基因的 隱隱性突變。將442株野生型植株單株收獲和播種,后代發(fā)生性狀分離的植株占 2/32/3,則進一步確認上述推測。
(2)為進一步確定突變性狀與Ds發(fā)生切離轉(zhuǎn)座的相關(guān)性,設(shè)計6種引物(如圖1),對上述572株子代的T-DNA進行PCR檢測。
①檢測原理:Ds未發(fā)生切離的DNA位點,通過引物 b和db和d可得到400bp的擴增產(chǎn)物;Ds已發(fā)生切離的DNA位點通過引物 c和dc和d可得到870bp的擴增產(chǎn)物。
②擴增產(chǎn)物的電泳結(jié)果如圖2,據(jù)此判斷 BB類型為淡綠葉突變體。若A類型:B類型:C類型=2:1:12:1:1,則突變性狀產(chǎn)生與Ds片段的切離轉(zhuǎn)座有關(guān)。
【答案】F2;隱;2/3;b和d;c和d;B;2:1:1
【解答】
【點評】
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