研究人員從土壤中分離獲得能分解纖維素的細(xì)菌（A菌），從A菌中提取一種纖維素酶基因（CBHI）并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后與高效表達(dá)載體pUT質(zhì)粒（圖1）連接構(gòu)建成重組質(zhì)粒并導(dǎo)入A菌，從而獲得分解纖維素能力更強(qiáng)的工程菌（B菌）。

限制酶	識(shí)別序列及酶切位點(diǎn)
BglⅡ	A↓GATCT
BstEⅡ	G↓GTAACC
SacⅠ	G↓AGCTC
MspⅠ	G↓CGG
BamHⅠ	G↓GATCC

（1）CBHⅡ基因兩端需添加相關(guān)酶切位點(diǎn)才能與pUT質(zhì)粒連接，因此在擴(kuò)增CBHⅡ基因時(shí)，需要在兩種引物上分別添加

AGATCT

AGATCT

序列和

GGTAACC

GGTAACC

序列。
（2）為鑒定重組質(zhì)粒是否構(gòu)建成功，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入A菌，并將其接種在含

抗生素N

抗生素N

的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，然后提取3個(gè)不同菌落的質(zhì)粒分別進(jìn)行雙酶切驗(yàn)證將酶切片段和CBHⅡ基因分別進(jìn)行電泳，結(jié)果如下圖2所示。據(jù)此分析，菌落

2、3

2、3

中成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒。
（3）圖3中B鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，轉(zhuǎn)錄時(shí)mRNA自身的延伸方向?yàn)?′→3′。為了使CBHⅡ基因按照正確的方向與已被酶切的pUT質(zhì)粒連接，圖中酶切位點(diǎn)1和酶切位點(diǎn)2所對(duì)應(yīng)的酶分別是

BglⅡB、stEⅡ

BglⅡB、stEⅡ

。
（4）為檢測(cè)B菌的纖維素分解能力，將含有20%纖維素的培養(yǎng)基分為三組，進(jìn)行不同處理后，在相同條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，測(cè)定培養(yǎng)基中纖維素含量，結(jié)果如圖4所示，則對(duì)照組2 的處理為

接種A菌

接種A菌

，說(shuō)明

B菌分解纖維素能力比A菌更強(qiáng)

B菌分解纖維素能力比A菌更強(qiáng)

。預(yù)期該工程菌在處理廢棄物及保護(hù)環(huán)境方面可能的應(yīng)用，舉一個(gè)實(shí)例

降解秸稈，減少秸稈燃燒帶來(lái)的空氣污染

降解秸稈，減少秸稈燃燒帶來(lái)的空氣污染

。