苯丙酮尿癥是PKU基因突變引起，研究人員嘗試用基因治療的方式治療該疾病，即將正?；駾導入攜帶有突變基因的細胞中。圖甲為A、B、C三種質(zhì)粒，圖乙為含有目的基因D的DNA片段，圖丙表示重組載體的示意圖。其中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lacZ為藍色顯色基因（基因表達的產(chǎn)物將無色化合物X-gal轉(zhuǎn)化成一種藍色物質(zhì)，菌落呈藍色），EcoRI（0.7Kb）、Pvul（0.8Kb）等為限制酶及其切割位點與復制原點之間的距離。已知1Kb=1000個堿基對。請結(jié)合所學知識回答：
（1）將正常的D基因?qū)胧荏w細胞的基因工程操作步驟中，其核心是 基因表達載體的構(gòu)建基因表達載體的構(gòu)建，據(jù)圖分析上述甲圖中三種質(zhì)粒中不宜作為運載體的有 ACAC，請分析原因 質(zhì)粒A缺少標記基因，質(zhì)粒C復制原點被限制酶切割質(zhì)粒A缺少標記基因，質(zhì)粒C復制原點被限制酶切割。
（2）若要獲取目的基因D，上述乙圖中應(yīng)選擇限制酶 PvuⅠPvuⅠ對其所在的DNA進行切割。如果僅知道D基因首尾的部分核苷酸序列，通?？筛鶕?jù)該基因首尾兩端的已知核苷酸序列合成 引物引物，利用 PCRPCR技術(shù)得到大量目的基因。
（3）將目的基因D和甲圖中可做載體的質(zhì)粒進行連接后，會得到圖丙中三種連接方式。需要選出正向連接的重組質(zhì)粒，可使用 EcoRⅠEcoRⅠ酶切割所獲得的重組質(zhì)粒。完全酶切后，進行電泳分析。若是載體自連，電泳圖譜中出現(xiàn)2.7Kb 一條帶，若是正向連接載體和反向連接載體，電泳圖譜中出現(xiàn)長度分別為 1.1Kb和5.6Kb1.1Kb和5.6Kb和 3.1Kb和3.6Kb3.1Kb和3.6Kb。
（4）選擇自身不含lacZ基因且對抗生素敏感的大腸桿菌作為受體細胞，在已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒、空質(zhì)粒的受體細胞中和未轉(zhuǎn)化成功的細胞中如何篩選出成功導入重組質(zhì)粒的受體細胞？在含有氨芐青霉素的加入X-gal培養(yǎng)基上培養(yǎng)經(jīng)轉(zhuǎn)化后的細胞，形成白色菌落的即為導入重組質(zhì)粒的受體細胞，藍色菌落的沒有導入重組細胞在含有氨芐青霉素的加入X-gal培養(yǎng)基上培養(yǎng)經(jīng)轉(zhuǎn)化后的細胞，形成白色菌落的即為導入重組質(zhì)粒的受體細胞，藍色菌落的沒有導入重組細胞。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】基因表達載體的構(gòu)建；AC；質(zhì)粒A缺少標記基因，質(zhì)粒C復制原點被限制酶切割；PvuⅠ；引物；PCR；EcoRⅠ；1.1Kb和5.6Kb；3.1Kb和3.6Kb；在含有氨芐青霉素的加入X-gal培養(yǎng)基上培養(yǎng)經(jīng)轉(zhuǎn)化后的細胞，形成白色菌落的即為導入重組質(zhì)粒的受體細胞，藍色菌落的沒有導入重組細胞
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：18引用：1難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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