土壤鹽漬化影響水稻生長(zhǎng)發(fā)育?？蒲腥藛T將水稻耐鹽基因0sMYB56導(dǎo)入不耐鹽堿水稻品種吉粳88中，培育出了4株耐鹽堿水稻新品種。其操作流程及相關(guān)限制酶識(shí)別序列和切割位點(diǎn)如圖1，圖中I～Ⅲ為限制酶的酶切位點(diǎn)，bar為抗除草劑基因，Kan為卡那霉素抗性基因。請(qǐng)回答下列問題：
?

限制酶	EcoRⅠ	BamHⅠ	HindⅢ	SacI
識(shí)別序列和切制位點(diǎn)	GAATTC	G'GATCC	A'AGCTT	GAGCT'C

（1）與DNA的體內(nèi)復(fù)制相比，過(guò)程①需要用超過(guò)90℃的高溫來(lái)代替

解旋

解旋

酶的作用。
（2）進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，反應(yīng)的溫度和時(shí)間需根據(jù)具體情況進(jìn)行設(shè)定，下列選項(xiàng)中

C

C

（填字母）的設(shè)定與引物有關(guān)，

F

F

（填字母）的設(shè)定與擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度有關(guān)。
A．變性溫度B．變性時(shí)間C．復(fù)性溫度D．復(fù)性時(shí)間E．延伸溫度F．延伸時(shí)間
（3）過(guò)程①所用的一對(duì)引物如下，則過(guò)程②使用的限制酶是

BamHI

BamHI

和

SacI

SacI

。
5'-CGCGGATCCATGAGAAAGGGCCCGTGG-3'
5'-CGAGCTCCTATCCCCAGAGAGGTAGCGA-3'
（4）科研人員采用特定的方法大量提取成功轉(zhuǎn)化的4株植株葉片的基因組DNA（目的基因中不含AAGCTT序列），用HindⅢ全酶切，將產(chǎn)物經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜后與目的基因的探針雜交，其雜交帶結(jié)果如圖2所示（圖中數(shù)字標(biāo)號(hào)代表轉(zhuǎn)化成功的植株）。下列分析正確的有

ABC

ABC

（填字母）。
A．雜交帶位置不同說(shuō)明經(jīng)HindⅢ酶切后形成的DNA片段長(zhǎng)度不同
B．還有不含目的基因的DNA條帶在圖中沒有顯示
C．目的基因插入到受體細(xì)胞核DNA的位置和數(shù)量都是隨機(jī)的
D．相同位置上雜交帶對(duì)應(yīng)DNA片段的脫氧核苷酸序列相同
（5）花椰菜病毒啟動(dòng)子位于基因的上游，緊挨轉(zhuǎn)錄的起始位點(diǎn)，是

RNA聚合酶識(shí)別

RNA聚合酶識(shí)別

的部位，本研究中設(shè)計(jì)兩個(gè)相同啟動(dòng)子分別連接bar和目的基因，其目的是

結(jié)合依據(jù)bar表達(dá)推測(cè)目的基因同時(shí)表達(dá)

結(jié)合依據(jù)bar表達(dá)推測(cè)目的基因同時(shí)表達(dá)

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