異丁醇具有燃值高、能量密度高等優(yōu)點，其開發(fā)和利用對優(yōu)化我國能源結(jié)構(gòu)和保護環(huán)境有非常重要的意義?？蒲腥藛T構(gòu)建了一種表達載體pUC18（如圖1）導(dǎo)入酵母菌，用于過量表達ILV2、ILV5、ILV3、AR010基因，以期實現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)異丁醇。圖2是酵母細胞中葡萄糖代謝產(chǎn)生異丁醇、乙醇和乙酸的示意圖，其中基因ADHs和ALDs分別控制E酶和F酶的合成?；卮鹣铝袉栴}：
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（1）將基因ILV2、ILV5、ILV3和AR010依次插入到質(zhì)粒上的目的基因插入位點，選用高表達啟動子pTEF1和

終止子

終止子

作為調(diào)控序列。pTEF1是

RNA聚合酶

RNA聚合酶

識別并結(jié)合的位點。
（2）科研人員先將pUC18轉(zhuǎn)化到大腸桿菌細胞中，以便篩選、保存和擴增重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒上的

原核

原核

（填“真核”或“原核”）生物復(fù)制原點使pUC18能在大腸桿菌中擴增。已知氨芐青霉素抑制細菌細胞壁的合成，pUC18中氨芐青霉素抗性基因的作用是

作為標記基因用于篩選出含有重組質(zhì)粒（或目的基因）的大腸桿菌細胞

作為標記基因用于篩選出含有重組質(zhì)粒（或目的基因）的大腸桿菌細胞

。
（3）提取完整的重組pUC18并導(dǎo)入組氨酸缺陷型釀酒酵母細胞中，將菌株接種在培養(yǎng)基中以獲得單菌落，該過程稱為微生物的

選擇

選擇

培養(yǎng)。除必要的營養(yǎng)物質(zhì)外，該選擇培養(yǎng)基中需要添加的物質(zhì)是

C

C

。
A．組氨酸
B．氨芐青霉素
C．瓊脂
（4）根據(jù)圖示酵母細胞葡萄糖的代謝途徑，為了進一步提高異丁醇的產(chǎn)量，應(yīng)對基因

ADHs和ALDs

ADHs和ALDs

進行改造使其表達產(chǎn)物減少。