蘇云金芽孢桿菌中含有一種抗蟲(chóng)基因（Bt基因），通過(guò)產(chǎn)生蘇云金芽孢桿菌伴孢晶體蛋白（Bt抗蟲(chóng)蛋白），破壞鱗翅目昆蟲(chóng)的消化系統(tǒng)來(lái)殺死棉鈴蟲(chóng)?？茖W(xué)家將該細(xì)菌的“殺蟲(chóng)基因”轉(zhuǎn)到棉花里，培育出了抗蟲(chóng)棉，讓棉花也能產(chǎn)生Bt抗蟲(chóng)蛋白抵抗蟲(chóng)害。回答下列問(wèn)題：
（1）可利用PCR技術(shù)獲取并擴(kuò)增Bt基因，前提是要有一段Bt基因的核苷酸序列，這是因?yàn)?

有一段Bt基因的核苷酸序列才能設(shè)計(jì)引物

有一段Bt基因的核苷酸序列才能設(shè)計(jì)引物

。
（2）PCR與體內(nèi)DNA復(fù)制相比，其特殊之處有

離體條件、無(wú)需解旋酶、需要高溫、耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）

離體條件、無(wú)需解旋酶、需要高溫、耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）

（寫(xiě)出兩點(diǎn)）。若要由1個(gè)DNA分子復(fù)制8次，需要引物的數(shù)量為

254

254

個(gè)。
（3）Bt基因兩端的酶切位點(diǎn)如圖甲所示，圖乙中質(zhì)粒表達(dá)載體上的amp^R為青霉素抗性基因，tet^R為四環(huán)素抗性基因，P為啟動(dòng)子，小箭頭表示酶切位點(diǎn)。

實(shí)際操作中，一般EcoRⅠ和BamHⅠ兩種酶進(jìn)行切割，與只采用EcoRⅠ切割相比，用兩種酶切的優(yōu)勢(shì)一是避免

防止目的基因DNA片段和質(zhì)粒自身環(huán)化

防止目的基因DNA片段和質(zhì)粒自身環(huán)化

，二是避免造成反向連接。反向連接會(huì)導(dǎo)致目的基因表達(dá)出不同的蛋白質(zhì)，原因是

轉(zhuǎn)錄是從啟動(dòng)子開(kāi)始，到終止子結(jié)束，反向連接轉(zhuǎn)錄出的RNA序列不同，對(duì)應(yīng)的氨基酸序列不同

轉(zhuǎn)錄是從啟動(dòng)子開(kāi)始，到終止子結(jié)束，反向連接轉(zhuǎn)錄出的RNA序列不同，對(duì)應(yīng)的氨基酸序列不同

。
（4）將基因表達(dá)載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌后，要用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。已知未導(dǎo)入表達(dá)載體時(shí)農(nóng)桿菌對(duì)青霉素和四環(huán)素均不具抗性，在不含抗生素的培養(yǎng)基（標(biāo)記為A）中有經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化的農(nóng)桿菌單菌落（由一個(gè)菌體繁殖而成），挑取一部分菌接種到含有四環(huán)素的培養(yǎng)基（標(biāo)記為A₁）中培養(yǎng)，再挑取一部分菌接種到含有青霉素的培養(yǎng)基（標(biāo)記為A₂）中培養(yǎng)，若出現(xiàn)

A₁上形成菌落，A₂上不形成菌落

A₁上形成菌落，A₂上不形成菌落

結(jié)果，說(shuō)明轉(zhuǎn)化成功。
（5）轉(zhuǎn)基因棉花是否培育成功還要對(duì)棉花進(jìn)行

個(gè)體

個(gè)體

水平的檢驗(yàn)。