土壤鹽漬化影響水稻生長發(fā)育，將水稻耐鹽堿基因OsMYB56導(dǎo)入不耐鹽堿水稻品種吉粳88中，培育耐鹽堿水稻新品種，其操作流程及可能用到的限制酶如圖，其中bar為抗除草劑基因，Tet^r為四環(huán)素抗性基因，Amp³為氨芐青霉素抗性基因，①～⑦表示操作過程，請回答下列問題：

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	smaⅠ	Sau3AⅠ
識別位點及切割位點	-G↓GATCC-	-T↓GATCA-	-CCC↓GGG-	-↓GATC-

（1）過程①PCR擴增OsMYB56基因時加需要添加引物，其作用是

使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸

使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸

；應(yīng)選用引物組合

a、d

a、d

。
a.5'-CTTGGATGAT-3'
b.5'-TAAGTTGTCT-3'
c.5'-TAGTAGGTTC-3'
d.5'-TCTGTTGAAT-3'
e.5'ATTCAACAGA-3'
f.5'ATCATCCAAG-3'
（2）根據(jù)基因表達載體的結(jié)構(gòu)組成分析，Ti質(zhì)粒中的CaMV35S是

啟動子

啟動子

；OsMYB56基因和bar基因編碼鏈的方向

相反

相反

（填“相同”或“相反”）。
（3）過程③應(yīng)選用限制酶

BclⅠ和SmaⅠ

BclⅠ和SmaⅠ

切割質(zhì)粒，利用所選限制酶進行操作的優(yōu)勢是

防止酶切后的質(zhì)粒自身環(huán)化，保證OsMYB56和酶切后的質(zhì)粒定向連接

防止酶切后的質(zhì)粒自身環(huán)化，保證OsMYB56和酶切后的質(zhì)粒定向連接

，切割后需要用

T4DNA連接酶

T4DNA連接酶

進行連接才能獲得重組質(zhì)粒。
（4）為了篩選出含重組質(zhì)粒的受體細胞，④過程應(yīng)在添加

四環(huán)素

四環(huán)素

的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)。培養(yǎng)后獲得的菌落不能判定是否含有重組質(zhì)粒，原因是

含未重組Ti質(zhì)粒（或普通Ti質(zhì)粒）的受體細胞也能正常生長

含未重組Ti質(zhì)粒（或普通Ti質(zhì)粒）的受體細胞也能正常生長

。
（5）轉(zhuǎn)基因水稻對鹽堿環(huán)境具有較強適應(yīng)性，但安全性也需要引起重視。從基因安全的角度考慮，培育和種植過程需要完成下列哪些工作

ACD

ACD

。
A．轉(zhuǎn)化過程殘留農(nóng)桿菌及其廢棄的培養(yǎng)基等，需要經(jīng)滅菌后專門化處理
B．對轉(zhuǎn)基因水稻進行鹽堿脅迫實驗和除草劑抗性實驗，完成個體生物學(xué)水平的鑒定
C．轉(zhuǎn)基因水稻移植到大田后，要劃定隔離區(qū)，防止OsMYB56和bar基因通過花粉傳播
D．進行嚴(yán)密的毒理性評價、致敏性評價、營養(yǎng)學(xué)評價等食用或飼用安全評估