多酚氧化酶（PPO）基因的大量表達(dá)是促使果實褐變的主要原因之一。科研人員將獲得的PPO基因反向插入質(zhì)粒中，構(gòu)建PPO基因的反義表達(dá)載體（重組質(zhì)粒），并在農(nóng)桿菌介導(dǎo)下實現(xiàn)了對鴨梨組培苗的轉(zhuǎn)化，其操作流程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：

（1）可利用PCR技術(shù)獲取目的基因，依據(jù)的原理是

DNA半保留復(fù)制

DNA半保留復(fù)制

，該過程需要根據(jù)

多酚氧化酶（PPO）基因（目的基因）兩端的核苷酸序列

多酚氧化酶（PPO）基因（目的基因）兩端的核苷酸序列

設(shè)計特異性引物序列，過程①是

構(gòu)建基因表達(dá)載體

構(gòu)建基因表達(dá)載體

。
（2）應(yīng)選擇

SacⅠ和XbaⅠ

SacⅠ和XbaⅠ

兩種限制酶對質(zhì)粒進(jìn)行切割，使用兩種限制酶切割的優(yōu)點是

防止目的基因和運載體的自身環(huán)化及反向連接

防止目的基因和運載體的自身環(huán)化及反向連接

。
（3）PPO基因的反義表達(dá)載體導(dǎo)入到受體細(xì)胞后，表達(dá)出的mRNA與受體細(xì)胞中的多酚氧化酶（PPO）基因的mRNA能夠進(jìn)行

堿基互補配對

堿基互補配對

，從而

抑制

抑制

（填“抑制”或“促進(jìn)”）PPS基因的表達(dá)。
（4）過程③表示

再分化

再分化

，若想要誘導(dǎo)愈傷組織生根，需要的激素條件是

生長素用量與細(xì)胞分裂素用量的比值＞1

生長素用量與細(xì)胞分裂素用量的比值＞1

。