大麗輪枝菌（一種絲狀真菌）是引起棉花黃萎病的主要病原菌。為觀察大麗輪枝菌對棉花根的侵染路徑，研究人員利用綠色熒光蛋白基因（sGFP）轉(zhuǎn)染大麗輪枝菌，培育出表達綠色熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因菌株，主要過程如圖。分析回答下列問題：
（1）PCR擴增sGFP的原理是 DNA復制DNA復制，該過程需要根據(jù) sGFP兩端的核苷酸序列sGFP兩端的核苷酸序列設計特異性引物序列，在PCR反應體系中，添加的dNTP可提供 原料和能量原料和能量。
（2）由圖可知：為保證sGFP基因可以在大麗輪枝菌細胞中表達，需將sGFP插入 構(gòu)巢曲霉啟動子和終止子構(gòu)巢曲霉啟動子和終止子之間。
（3）圖中b鏈的黏性末端堿基序列（5'→3'）為 AGCTAGCT。
（4）過程②需要的工具酶是 DNA連接酶DNA連接酶。
（5）過程③中需要配制細菌培養(yǎng)基，配制時要在培養(yǎng)基滅菌并冷卻到80℃左右后，再加入潮霉素溶液，潮霉素不能與培養(yǎng)基一同滅菌的原因是 潮霉素在高溫滅菌時結(jié)構(gòu)會被破壞潮霉素在高溫滅菌時結(jié)構(gòu)會被破壞。用該培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)農(nóng)桿菌，得到多個菌落，提取全部細菌質(zhì)粒DNA，用BamHⅠ和HindⅢ完全酶切，可以得到 33種長度不同的DNA片段。
（6）將導入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌加入大麗輪枝菌的孢子細胞懸液中，在適宜條件下完成轉(zhuǎn)染后利用濾膜過濾得到孢子細胞，再在真菌培養(yǎng)基上培養(yǎng)獲得菌落，最終通過檢測 大麗輪枝菌細胞中綠色熒光的強度大麗輪枝菌細胞中綠色熒光的強度篩選出綠色熒光蛋白旺盛表達的大麗輪枝菌。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA復制；sGFP兩端的核苷酸序列；原料和能量；構(gòu)巢曲霉啟動子和終止子；AGCT；DNA連接酶；潮霉素在高溫滅菌時結(jié)構(gòu)會被破壞；3；大麗輪枝菌細胞中綠色熒光的強度
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/9/12 6:0:10組卷：49引用：4難度：0.5
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1．下列有關基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6