科研人員利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將抗除草劑基因?qū)敫仕{(lán)，過(guò)程如圖1所示，①～④為操作步驟，載體上BamHⅠ、BglⅡ、EcoRⅠ酶切位點(diǎn)唯一，識(shí)別序列和切割位點(diǎn)見(jiàn)表。
| 限制酶 | 識(shí)別序列和切割位點(diǎn) |
| BamHⅠ | -G↓GATCC- |
| BglⅡ | -A↓GATCT- |
| EcoRⅠ | -G↓AATTC- |
基因表達(dá)載體的構(gòu)建
基因表達(dá)載體的構(gòu)建
，其目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用
使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用
。（2）若目的基因用BamHⅠ和BglⅡ剪切，質(zhì)粒用BamHⅠ剪切，剪切后的目的基因和質(zhì)粒能連接在一起，原因是
BamHI和BglⅡ切割DNA后產(chǎn)生相同的黏性末端
BamHI和BglⅡ切割DNA后產(chǎn)生相同的黏性末端
。酶切后的目的基因存在正向與反向兩種連接方式，可用BamHI和EcoRI
BamHI和EcoRI
酶對(duì)兩種重組質(zhì)粒進(jìn)行剪切，通過(guò)凝膠電泳分析產(chǎn)物大小進(jìn)行區(qū)分，如圖2所示，圖中樣品2
樣品2
（樣品1/樣品2）為所需基因表達(dá)載體。（3）步驟②用
Ca2+
Ca2+
處理農(nóng)桿菌后獲得感受態(tài)細(xì)胞，以便將重組質(zhì)粒導(dǎo)入。步驟③將農(nóng)桿菌與甘藍(lán)愈傷組織共培養(yǎng)后，在步驟④的培養(yǎng)基中添加潮霉素
潮霉素
以便篩選出含目的基因的甘藍(lán)植株。若要檢測(cè)甘藍(lán)是否具有抗除草劑的性狀，需要在個(gè)體水平通過(guò)噴灑適宜濃度的除草劑
噴灑適宜濃度的除草劑
進(jìn)行檢測(cè)。【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】基因表達(dá)載體的構(gòu)建；使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用；BamHI和BglⅡ切割DNA后產(chǎn)生相同的黏性末端；BamHI和EcoRI；樣品2；Ca2+；潮霉素；噴灑適宜濃度的除草劑
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：14引用：3難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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