血栓對健康有極大危害。來源于金黃色葡萄球菌的天然葡激酶（SAK）是一種新型溶栓制劑，因易誘發(fā)免疫反應而嚴重限制了應用。人HC蛋白參與免疫抑制反應，對機體保護性的免疫調(diào)節(jié)有著重要作用。研究人員預測，將SAK與人HC蛋白融合形成的SAK-HC融合蛋白不僅能夠發(fā)揮高效溶栓作用，且能降低機體免疫系統(tǒng)對葡激酶的反應，這將具有極大的臨床應用前景。
（1）獲取SAK-HC融合基因。設計引物分別擴增SAK基因和HC基因，其中HC基因的引物D中增加了一段與SAK基因相同的序列。SAK基因擴增時引物（F和N）位置如圖1所示，請在方框內(nèi)繪制出HC基因擴增的引物（D和R）位置。將得到的SAK基因和HC基因1：1混合，經(jīng)再次擴增即可得到SAK-HC融合基因。
（2）利用 限制酶和DNA連接限制酶和DNA連接酶將融合基因與質(zhì)粒構建基因表達載體，轉(zhuǎn)化經(jīng) Ca2+Ca2+處理的大腸桿菌。篩選、培養(yǎng)大腸桿菌，提取質(zhì)粒進行電泳分析（圖2），結(jié)果顯示融合基因已成功導入大腸桿菌，理由是 轉(zhuǎn)基因大腸桿菌提取出的質(zhì)粒經(jīng)酶切后的電泳結(jié)果中存在與融合基因PCR的電泳結(jié)果相同的片段轉(zhuǎn)基因大腸桿菌提取出的質(zhì)粒經(jīng)酶切后的電泳結(jié)果中存在與融合基因PCR的電泳結(jié)果相同的片段，為保證檢測結(jié)果的準確性，還應對重組質(zhì)粒酶切的產(chǎn)物進行 DNA測序DNA測序。
（3）培養(yǎng)轉(zhuǎn)化成功的大腸桿菌一段時間后，破裂細胞、提取純化融合蛋白并用緩沖液稀釋，進行活性鑒定。培養(yǎng)基中加入纖維蛋白原、纖溶酶原、凝血酶等模擬血栓形成，搖勻至渾濁立即倒平板，用打孔器在冷卻的平板上打加樣孔，并加入不同的樣品，結(jié)果如圖3。據(jù)圖判斷，表中a、b分別是 SAK-HC融合蛋白SAK-HC融合蛋白、樣品稀釋緩沖液樣品稀釋緩沖液。一段時間后測量培養(yǎng)基上 透明圈直徑大小透明圈直徑大小，由結(jié)果可知 融合蛋白與傳統(tǒng)溶栓藥物尿激酶及其他方式改造的葡激酶的活性相當融合蛋白與傳統(tǒng)溶栓藥物尿激酶及其他方式改造的葡激酶的活性相當，說明融合蛋白具有進一步臨床應用研究的價值。
| 加樣孔 | 樣品 | 劑量 |
| 1 | 傳統(tǒng)溶栓藥物尿激酶 | 10μL |
| 2 | 傳統(tǒng)溶栓藥物尿激酶 | 20μL |
| 3 | a | 10μL |
| 4 | a | 20μL |
| 5 | 其他方式改造的葡激酶 | 10μL |
| 6 | 其他方式改造的葡激酶 | 20μL |
| 7 | b | 20μL |
設計葡激酶的第77位精氨酸替換為其它氨基酸→根據(jù)新的葡激酶氨基酸序列推測葡激酶基因的堿基序列→改造或合成新的葡激酶基因→將新的葡激酶基因通過基因工程轉(zhuǎn)化大腸桿菌→獲得新型葡激酶
設計葡激酶的第77位精氨酸替換為其它氨基酸→根據(jù)新的葡激酶氨基酸序列推測葡激酶基因的堿基序列→改造或合成新的葡激酶基因→將新的葡激酶基因通過基因工程轉(zhuǎn)化大腸桿菌→獲得新型葡激酶
。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】限制酶和DNA連接；Ca2+；轉(zhuǎn)基因大腸桿菌提取出的質(zhì)粒經(jīng)酶切后的電泳結(jié)果中存在與融合基因PCR的電泳結(jié)果相同的片段；DNA測序；SAK-HC融合蛋白；樣品稀釋緩沖液；透明圈直徑大?。蝗诤系鞍着c傳統(tǒng)溶栓藥物尿激酶及其他方式改造的葡激酶的活性相當；設計葡激酶的第77位精氨酸替換為其它氨基酸→根據(jù)新的葡激酶氨基酸序列推測葡激酶基因的堿基序列→改造或合成新的葡激酶基因→將新的葡激酶基因通過基因工程轉(zhuǎn)化大腸桿菌→獲得新型葡激酶
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：11引用：1難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質(zhì)工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6