漆酶降解木質(zhì)素能力較強(qiáng),在紙漿生物漂白、廢水處理、苯氧基類除草劑去毒等領(lǐng)域具有廣泛的研究和應(yīng)用價(jià)值。實(shí)際應(yīng)用于生產(chǎn)的漆酶主要來源于白腐真菌,從白腐真菌中篩選出高產(chǎn)漆酶菌株對(duì)實(shí)現(xiàn)木質(zhì)素的降解至關(guān)重要。請(qǐng)回答下列問題:
液體培養(yǎng)基:以木質(zhì)素為唯一碳源。
固體培養(yǎng)基:主要成分有馬鈴薯浸出液、葡萄糖、瓊脂、愈創(chuàng)木酚(漆酶可將其催化成一種紅褐色物質(zhì))
(1)研究人員從不同環(huán)境地表上采集土壤、腐爛的樹枝等接種到液體培養(yǎng)基,在28℃條件下?lián)u床培養(yǎng)。
①液體培養(yǎng)基常采用 高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌的方法進(jìn)行滅菌。搖床培養(yǎng)的目的是 增加溶液中的氧氣以滿足菌株的細(xì)胞呼吸的需求,使菌株與溶液成分接觸更均勻增加溶液中的氧氣以滿足菌株的細(xì)胞呼吸的需求,使菌株與溶液成分接觸更均勻。
②取培養(yǎng)液1mL采用 稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法接種于固體選擇培養(yǎng)基于28℃恒溫箱倒置培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖。
選擇菌落 菌落C菌落C作為高產(chǎn)漆酶菌株,理由是 菌落A周圍沒有出現(xiàn)紅褐色圈,說明不能分泌漆酶;菌落B、C周圍均出現(xiàn)紅褐色圈且大小相似,但由于菌落C直徑小于菌落B,說明菌落C分泌的漆酶數(shù)量多和活性強(qiáng),因此選擇菌落C菌落A周圍沒有出現(xiàn)紅褐色圈,說明不能分泌漆酶;菌落B、C周圍均出現(xiàn)紅褐色圈且大小相似,但由于菌落C直徑小于菌落B,說明菌落C分泌的漆酶數(shù)量多和活性強(qiáng),因此選擇菌落C。
(2)實(shí)際生產(chǎn)中,通過培養(yǎng)白腐真菌獲取的漆酶蛋白往往與其它物質(zhì)混合在一起。因此,得到漆酶的粗提取物后,先要通過 透析透析和 凝膠色譜法凝膠色譜法法進(jìn)行純化,再通過 電泳電泳鑒定漆酶的純度。
(3)游離的漆酶穩(wěn)定性差,在環(huán)境中易受溫度、pH等因素的影響,且不易分離和回收,這在一定程度上限制了漆酶的工業(yè)化應(yīng)用。請(qǐng)根據(jù)所學(xué)知識(shí)提出一項(xiàng)解決措施:利用固定化技術(shù)固定白腐真菌細(xì)胞(或固定漆酶)利用固定化技術(shù)固定白腐真菌細(xì)胞(或固定漆酶)。
【考點(diǎn)】微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù);酶的特性及應(yīng)用.
【答案】高壓蒸汽滅菌;增加溶液中的氧氣以滿足菌株的細(xì)胞呼吸的需求,使菌株與溶液成分接觸更均勻;稀釋涂布平板法;菌落C;菌落A周圍沒有出現(xiàn)紅褐色圈,說明不能分泌漆酶;菌落B、C周圍均出現(xiàn)紅褐色圈且大小相似,但由于菌落C直徑小于菌落B,說明菌落C分泌的漆酶數(shù)量多和活性強(qiáng),因此選擇菌落C;透析;凝膠色譜法;電泳;利用固定化技術(shù)固定白腐真菌細(xì)胞(或固定漆酶)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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