胰島素A、B鏈分別表達(dá)法是生成胰島素的方法之一,圖1是該方法所用的基因表達(dá)載體,圖2表示利用大腸桿菌作為工程菌生產(chǎn)人胰島素的基本流程(融合蛋白A、B分別表示β-半乳糖苷酶與胰島素A、B鏈融合的蛋白),請(qǐng)回答下列問(wèn)題:
(1)圖1基因表達(dá)載體中沒(méi)有標(biāo)注出來(lái)的基本結(jié)構(gòu)是終止子終止子.
(2)圖1中啟動(dòng)子是RNA聚合RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,有了它才能啟動(dòng)目的基因的表達(dá),氨芐青霉素抗性基因的作用是作為標(biāo)記基因,將含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來(lái)作為標(biāo)記基因,將含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來(lái).
(3)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)必需的工具酶有限制酶和DNA連接酶限制酶和DNA連接酶.
(4)β-半乳糖苷酶與胰島素A鏈或B鏈融合表達(dá),可將胰島素肽鏈上蛋白酶的切割位點(diǎn)隱藏在內(nèi)部,其意義在于防止胰島素的A、B鏈被菌體內(nèi)蛋白酶降解防止胰島素的A、B鏈被菌體內(nèi)蛋白酶降解.
(5)溴化氰能切斷肽鏈中甲硫氨酸羧基端的肽鍵,用溴化氰處理相應(yīng)的融合蛋白能獲得完整的A鏈或B鏈,且β-半乳糖苷酸被切成多個(gè)肽段,這是因?yàn)?!--BA-->β-半乳糖苷酶中含有多個(gè)甲硫氨酸,而胰島素的A、B鏈中不含甲硫氨酸β-半乳糖苷酶中含有多個(gè)甲硫氨酸,而胰島素的A、B鏈中不含甲硫氨酸.
(6)根據(jù)圖2中胰島素的結(jié)構(gòu),請(qǐng)推測(cè)每個(gè)胰島素分子中所含游離氨基的數(shù)量,你得推測(cè)結(jié)果是至少2個(gè)至少2個(gè),理由是兩條肽鏈的一端各有一個(gè)游離的氨基,氨基酸R基團(tuán)中可能還含有游離的氨基兩條肽鏈的一端各有一個(gè)游離的氨基,氨基酸R基團(tuán)中可能還含有游離的氨基.
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】終止子;RNA聚合;作為標(biāo)記基因,將含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來(lái);限制酶和DNA連接酶;防止胰島素的A、B鏈被菌體內(nèi)蛋白酶降解;β-半乳糖苷酶中含有多個(gè)甲硫氨酸,而胰島素的A、B鏈中不含甲硫氨酸;至少2個(gè);兩條肽鏈的一端各有一個(gè)游離的氨基,氨基酸R基團(tuán)中可能還含有游離的氨基
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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