培育出油脂高產(chǎn)的四尾柵藻是獲取生物柴油的新途徑。科學(xué)家欲從紫蘇中提取DGAT1基因（催化油脂合成的關(guān)鍵酶基因），導(dǎo)入到四尾柵藻細(xì)胞，獲得轉(zhuǎn)基因油脂高產(chǎn)的四尾柵藻，流程如圖。質(zhì)粒pCAMBIA與PCR擴(kuò)增出的DGAT1的酶切位點(diǎn)如圖所示?，F(xiàn)有BamHⅠ、BglⅡ、EcoRⅠ三種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識(shí)別并切割的堿比序列如下表，請(qǐng)回答下列問題：
（注：bp意為“堿基對(duì)”，是DNA的長(zhǎng)度單位）
| BamHⅠ | 5'G↓GATCC3' |
| BglⅡ | 5'A↓GATCT3' |
| EcoRⅠ | 5'G↓AATTC3' |
構(gòu)建基因表達(dá)載體
構(gòu)建基因表達(dá)載體
。（2）①過程需要
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
酶的催化，過程②通過PCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)，進(jìn)行PCR時(shí)，需要在兩種引物的5'端添加限制酶 BglⅡ
BglⅡ
的識(shí)別序列。（3）將DCAT1與pCAMBLA分別用限制酶切割后進(jìn)行連接可形成重組質(zhì)粒，目的基因和質(zhì)粒能連接成重組質(zhì)粒的原因是
有相同的黏性末端可發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)
有相同的黏性末端可發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)
。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌后，可向培養(yǎng)基中加入 卡那霉素
卡那霉素
篩選出導(dǎo)入質(zhì)粒的大腸桿菌。（4）篩選出的重組質(zhì)粒存在DGAT1基因，但DCAT1在四尾柵藻細(xì)胞中表達(dá)出的肽鏈不正確，原因可能是
目的基因反向連接到質(zhì)粒上
目的基因反向連接到質(zhì)粒上
。為進(jìn)一步篩選出符合要求的重組質(zhì)粒，可選用限制酶EcoRⅠ對(duì)不同的重組質(zhì)粒進(jìn)行酶切處理，若某重組質(zhì)粒為所需質(zhì)粒，則其酶切產(chǎn)物長(zhǎng)度為 2400bp與800bp
2400bp與800bp
（已知質(zhì)粒pCAMBIA中ECoRⅠ的酶切位點(diǎn)與BamHⅠ的酶切位點(diǎn)間的最短距離為600bp。）【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】構(gòu)建基因表達(dá)載體；逆轉(zhuǎn)錄；BglⅡ；有相同的黏性末端可發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)；卡那霉素；目的基因反向連接到質(zhì)粒上；2400bp與800bp
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/5/15 8:0:8組卷：8引用：2難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
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