2020年諾貝爾化學(xué)獎授予了兩位開發(fā)出CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的科學(xué)家，該技術(shù)在實體瘤研究中得到廣泛應(yīng)用。Cas9蛋白可以結(jié)合一段sgRNA，這段sgRNA可以引導(dǎo)Cas9蛋白部分與特定的DNA序列結(jié)合，最終實現(xiàn)對靶基因序列的編輯。
（1）CRISPR/Cas9系統(tǒng)中的Cas9蛋白與sgRNA結(jié)合后對特定的DNA序列識別并在PAM序列（幾乎存在于所有基因中）上游切割，其功能類似于基因工程工具酶中的

限制酶（限制性核酸內(nèi)切酶）

限制酶（限制性核酸內(nèi)切酶）

。研究發(fā)現(xiàn)，CRISPR/Cas9系統(tǒng)在自然界中僅存在于原核生物中，故需要借助

基因工程（轉(zhuǎn)基因）

基因工程（轉(zhuǎn)基因）

技術(shù)才能在真核細胞中發(fā)揮作用。分析該系統(tǒng)在細菌體內(nèi)可能的生理作用是

切割外源DNA，保護自身

切割外源DNA，保護自身

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（2）結(jié)直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，研究發(fā)現(xiàn)APC基因發(fā)生突變引起的結(jié)腸和直腸腺瘤性息肉與結(jié)直腸癌密切相關(guān)。利用該技術(shù)可敲除APC基因獲得APC基因缺失的結(jié)腸細胞，通過黏膜注射，將APC基因缺失結(jié)腸細胞原位移植入免疫缺陷小鼠，生成腺瘤，獲得結(jié)直腸癌小鼠模型，請寫出該模型的一種應(yīng)用

研究藥物對結(jié)直腸癌治療效果；研究結(jié)直腸癌的發(fā)病機理

研究藥物對結(jié)直腸癌治療效果；研究結(jié)直腸癌的發(fā)病機理

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（3）2019 年上?？蒲袌F隊通過基因編輯技術(shù)切除獼猴受精卵中的生物節(jié)律核心基因BMAL1，再利用體細胞克隆技術(shù)，獲得了5只 MAL1基因敲除的克隆猴。這是國際上首次成功構(gòu)建出的一批遺傳背景一致的生物節(jié)律紊亂的獼猴模型。在個體水平鑒定BMAL1基因敲除成功的方法是觀察獼猴是否表現(xiàn)為

生物節(jié)律紊亂

生物節(jié)律紊亂

，該團隊利用一只BMAL1缺失的成年獼猴體細胞克隆出5只后代的實驗中，涉及的生物技術(shù)有

動物體細胞核移植、動物細胞培養(yǎng)、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植

動物體細胞核移植、動物細胞培養(yǎng)、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植

（答出兩項即可）。
（5）CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)有時存在“脫靶”現(xiàn)象，即編輯了不該編輯的基因，試從引導(dǎo)RNA的角度分析脫靶的原因：

其它DNA片段上也含有與引導(dǎo)RNA互補配對的序列，造成編輯對象出錯而脫靶

其它DNA片段上也含有與引導(dǎo)RNA互補配對的序列，造成編輯對象出錯而脫靶

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