黃瓜花葉病毒(CMV)是能侵染多種植物的RNA病毒,可危害番茄的正常生長(zhǎng)并造成減產(chǎn)。研究人員通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)將該病毒外殼蛋白的cDNA導(dǎo)入番茄植株中,成功獲得抗CMV的番茄植株。
(1)獲得CMV的RNA后,在逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄的催化下才能合成CMV外殼蛋白的cDNA。
(2)獲得cDNA后,需先通過一定方法將其插入到農(nóng)桿菌的T-DNAT-DNA片段中,然后將番茄子葉切段與該農(nóng)桿菌共同培養(yǎng),以實(shí)現(xiàn)對(duì)番茄細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。
(3)將經(jīng)共同培養(yǎng)后的番茄外植體接種于含有卡那霉素和青霉素的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間,只有部分外植體生出愈傷組織。研究人員據(jù)此確定這些生出愈傷組織的外植體都已成功導(dǎo)入了cDNA,你認(rèn)為他們做出以上判斷的理由是重組表達(dá)載體同時(shí)含有卡那霉素抗性基因和青霉素抗性基因,只有成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的外植體才能在含有卡那霉素和青霉素的選擇培養(yǎng)基上生出愈傷組織 再分化重組表達(dá)載體同時(shí)含有卡那霉素抗性基因和青霉素抗性基因,只有成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的外植體才能在含有卡那霉素和青霉素的選擇培養(yǎng)基上生出愈傷組織 再分化。
(4)要想確定轉(zhuǎn)基因番茄已經(jīng)成功表達(dá)出CMV外殼蛋白,需要進(jìn)行抗原-抗體雜交抗原-抗體雜交實(shí)驗(yàn)。
(5)若要驗(yàn)證轉(zhuǎn)基因番茄具有較好的抗CMV能力,請(qǐng)寫出實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路用強(qiáng)致病力的CMV分別感染轉(zhuǎn)基因番茄與未轉(zhuǎn)基因的番茄,通過對(duì)照發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因番茄具有較好的抗CMV能力用強(qiáng)致病力的CMV分別感染轉(zhuǎn)基因番茄與未轉(zhuǎn)基因的番茄,通過對(duì)照發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因番茄具有較好的抗CMV能力。
轉(zhuǎn)基因番茄自交,子代中抗性植株與敏感植株數(shù)量之比接近3:1,由此可以得出的結(jié)論是目的基因已經(jīng)整合到受體細(xì)胞的染色體上目的基因已經(jīng)整合到受體細(xì)胞的染色體上、獲得的轉(zhuǎn)基因親本為雜合子獲得的轉(zhuǎn)基因親本為雜合子(答出兩點(diǎn))。
【答案】逆轉(zhuǎn)錄;T-DNA;重組表達(dá)載體同時(shí)含有卡那霉素抗性基因和青霉素抗性基因,只有成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的外植體才能在含有卡那霉素和青霉素的選擇培養(yǎng)基上生出愈傷組織 再分化;抗原-抗體雜交;用強(qiáng)致病力的CMV分別感染轉(zhuǎn)基因番茄與未轉(zhuǎn)基因的番茄,通過對(duì)照發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因番茄具有較好的抗CMV能力;目的基因已經(jīng)整合到受體細(xì)胞的染色體上;獲得的轉(zhuǎn)基因親本為雜合子
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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