甘蔗線條花葉病毒（SCSMV）是引發(fā)甘蔗花葉病的主要病原之一，在世界各大甘蔗區(qū)普遍發(fā)生，嚴重威脅甘蔗產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，如何建立快速有效的檢測方法對于該病毒的防控有著極為重要的意義。研究人員通過病株汁液提純得到病毒并以此制備抗體，由于不能完全排除寄主蛋白的影響，制備的抗體在檢測時易出現(xiàn)假陽性；改進科研方案后，研究人員利用基因工程和細胞工程技術(shù)制備出甘蔗線條花葉病毒（SCSMV）的P₁蛋白的單克隆抗體，相關(guān)流程如圖1所示，圖2為pET28a質(zhì)粒及P₁基因結(jié)構(gòu)示意圖。請回答下列問題。
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（1）甘蔗線條花葉病毒是一種RNA病毒，可采取RT-PCR法獲得大量P₁基因，該過程中需要用到的酶有

逆轉(zhuǎn)錄酶（將RNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA）和TaqDNA聚合酶

逆轉(zhuǎn)錄酶（將RNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA）和TaqDNA聚合酶

。
（2）圖1中，過程①需根據(jù)

P₁兩端（3′端）核苷酸（或堿基）序列

P₁兩端（3′端）核苷酸（或堿基）序列

設(shè)計特異性引物，還需在引物的5′端添加限制酶

Nco I和Sac I

Nco I和Sac I

的識別序列，確保P₁基因正確插入啟動子與終止子之間，其目的是

保證P1基因能夠正確表達

保證P1基因能夠正確表達

。已知P₁基因右端X處的堿基序列為5′-GAATAAAATACTAAAATCTTC-3′，則其中一個引物序列為5′-

GAAGATTTTAGTATTTTATTC

GAAGATTTTAGTATTTTATTC

-3′（從5′端到3′端）。
（3）pET28a-P1CS載體可導(dǎo)入經(jīng)

Ca²⁺

Ca²⁺

 處理的大腸桿菌以提高轉(zhuǎn)化效率。該載體上存在調(diào)節(jié)基因，在大腸桿菌中可指導(dǎo)合成阻遏蛋白，阻遏蛋白與操縱基因結(jié)合，阻止 

RNA聚合酶

RNA聚合酶

與啟動子結(jié)合，抑制P₁基因的轉(zhuǎn)錄，其原理如圖3所示。分析圖3可知，需將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含

卡那霉素

卡那霉素

 的培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)，并從培養(yǎng)液中分離提純P₁蛋白。
（4）圖1中的過程⑤目的是

使機體產(chǎn)生特異性的B淋巴細胞

使機體產(chǎn)生特異性的B淋巴細胞

，隨后可利用

聚乙二醇或滅活的病毒等

聚乙二醇或滅活的病毒等

誘導(dǎo)B細胞與骨髓瘤細胞融合，再進行篩選。獲得雜交瘤細胞后，在注入家兔腹腔前還應(yīng)進行

專一抗體檢驗陽性和克隆化培養(yǎng)

專一抗體檢驗陽性和克隆化培養(yǎng)

。