腫瘤血管生長(zhǎng)是腫瘤生長(zhǎng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié),血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是一種參與促進(jìn)腫瘤血管生長(zhǎng)的蛋白質(zhì),VEGF作為治療癌癥的靶分子受到了很多研究者的關(guān)注。
(1)VEGF 的受體存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞膜上細(xì)胞膜上,可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的分裂分化分裂分化,形成的細(xì)胞最終構(gòu)成新的血管。
(2)研究者利用噬菌體文庫(kù)篩選能與VEGF特異性結(jié)合的多肽。過(guò)程如下。
①將人工合成的編碼隨機(jī)六肽的基因插入噬菌體DNA,形成重組DNA分子,用重組DNA分子轉(zhuǎn)化大腸桿菌,大腸桿菌經(jīng)培養(yǎng)后裂解,產(chǎn)生噬菌體。這些噬菌體構(gòu)成一個(gè)文庫(kù),一個(gè)包含所有可能六肽的噬菌體文庫(kù)至少有206或64,000,000206或64,000,000種噬菌體組成,在這些噬菌體中可能有某種六肽能與VEGF特異性結(jié)合(圖一)。
②將VEGF能夠與受體結(jié)合的部位固定在微孔容器底部,在微孔中加入隨機(jī)肽文庫(kù),一段時(shí)間后用緩沖液洗去不能與VEGF結(jié)合的噬菌體,然后用含有VEGF或目標(biāo)分子VEGF或目標(biāo)分子的緩沖液將結(jié)合在微孔底部的噬菌體洗脫下來(lái),這種分子能夠與微孔容器底部的分子競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合噬菌體,這說(shuō)明噬菌體與目標(biāo)分子的結(jié)合是可逆可逆(可逆或不可逆)的。
③將洗脫下來(lái)的噬菌體轉(zhuǎn)入另一試管,加入大腸桿菌培養(yǎng)液大腸桿菌培養(yǎng)液,經(jīng)過(guò)一段時(shí)間振蕩培養(yǎng),產(chǎn)生新一代噬菌體庫(kù)。
④重復(fù)步驟②③多次。
(3)在多輪實(shí)驗(yàn)后產(chǎn)生的噬菌體文庫(kù)比第一代噬菌體文庫(kù)與VEGF的結(jié)合能力更強(qiáng),文庫(kù)中噬菌體的種類(lèi)更少(或更單一)更少(或更單一),請(qǐng)分析原因:只有少數(shù)能與目標(biāo)分子結(jié)合的噬菌體才能繁殖產(chǎn)生下一代文庫(kù),隨著傳代和選擇次數(shù)增加,競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合能力最強(qiáng)的幾種噬菌體被選擇出來(lái)只有少數(shù)能與目標(biāo)分子結(jié)合的噬菌體才能繁殖產(chǎn)生下一代文庫(kù),隨著傳代和選擇次數(shù)增加,競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合能力最強(qiáng)的幾種噬菌體被選擇出來(lái)。
(4)欲證明篩選到的多肽X能夠起到抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用,研究者設(shè)計(jì)了這樣的實(shí)驗(yàn):將多肽X溶液注射到?只腫瘤模型小鼠體內(nèi),(腫瘤型鼠是天然條件下就會(huì)產(chǎn)生腫瘤的小鼠品系),檢測(cè)VEGF與VEGF受體的結(jié)合能力。請(qǐng)對(duì)該實(shí)驗(yàn)做出評(píng)價(jià)并加以完善該實(shí)驗(yàn)方案存在缺陷,1、應(yīng)選擇多只各方面狀態(tài)相似的腫瘤模型小鼠,2、應(yīng)分為兩組,其中一組注射X肽,另一組注射其他六肽,3、應(yīng)檢測(cè)腫瘤大小或多少該實(shí)驗(yàn)方案存在缺陷,1、應(yīng)選擇多只各方面狀態(tài)相似的腫瘤模型小鼠,2、應(yīng)分為兩組,其中一組注射X肽,另一組注射其他六肽,3、應(yīng)檢測(cè)腫瘤大小或多少。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】細(xì)胞膜上;分裂分化;206或64,000,000;VEGF或目標(biāo)分子;可逆;大腸桿菌培養(yǎng)液;更少(或更單一);只有少數(shù)能與目標(biāo)分子結(jié)合的噬菌體才能繁殖產(chǎn)生下一代文庫(kù),隨著傳代和選擇次數(shù)增加,競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合能力最強(qiáng)的幾種噬菌體被選擇出來(lái);該實(shí)驗(yàn)方案存在缺陷,1、應(yīng)選擇多只各方面狀態(tài)相似的腫瘤模型小鼠,2、應(yīng)分為兩組,其中一組注射X肽,另一組注射其他六肽,3、應(yīng)檢測(cè)腫瘤大小或多少
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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