圖1為生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因抗蟲棉時(shí)使用的質(zhì)粒，圖2為生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因抗蟲棉時(shí)所用目的基因側(cè)翼涉及的限制酶的酶切位點(diǎn)。
（1）為了高效地構(gòu)建基因表達(dá)載體，最好選用 HindⅢ和BamHⅠHindⅢ和BamHⅠ（填限制酶名稱）同時(shí)酶切質(zhì)粒和目的基因。
（2）為了篩選出基因表達(dá)載體，需要將DNA連接酶處理后的溶液與大腸桿菌混合在一起進(jìn)行培養(yǎng)。為了促使大腸桿菌吸收外源DNA，需要用 CaCl2 或（Ca2+）CaCl2 或（Ca2+）處理大腸桿菌使其處于感受態(tài)。隨后再將大腸桿菌涂布在含 氨苯青霉素氨苯青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一般情況下這樣培養(yǎng)出來的大腸桿菌有兩種類型：一種是結(jié)合了目的基因的質(zhì)粒，一種是未結(jié)合目的基因的質(zhì)粒?？梢约尤?HindⅢ和BamHⅠHindⅢ和BamHⅠ分別去切割兩種質(zhì)粒，其中結(jié)合了目的基因的質(zhì)粒在酶切后能產(chǎn)生目的基因。
（3）圖示質(zhì)粒在設(shè)計(jì)時(shí)插入了T-DNA序列，并且將啟動(dòng)子、多克隆位點(diǎn)和終止子序列插入到T-DNA中（注：插入不會(huì)破壞T-DNA的作用），T-DNA的作用是 將 T‐DNA 之間的DNA序列轉(zhuǎn)移并整合至受體細(xì)胞的染色體DNA上將 T‐DNA 之間的DNA序列轉(zhuǎn)移并整合至受體細(xì)胞的染色體DNA上。
（4）有人擔(dān)心基因工程中使用的抗性基因可轉(zhuǎn)移至近緣生物中，本例中的質(zhì)粒能否有助于降低氨芐青霉素抗性基因轉(zhuǎn)移到近緣生物的風(fēng)險(xiǎn)？為什么？
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】HindⅢ和BamHⅠ；CaCl2 或（Ca2+）；氨苯青霉素；HindⅢ和BamHⅠ；將 T‐DNA 之間的DNA序列轉(zhuǎn)移并整合至受體細(xì)胞的染色體DNA上
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：15引用：3難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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