科研人員利用大腸桿菌構(gòu)建了抗蟲基因文庫。最新研究發(fā)現(xiàn)漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有顯著的殺蟲效果，現(xiàn)以p-B質(zhì)粒為載體，構(gòu)建AH基因的cDNA文庫。圖1表示p-B質(zhì)粒，其中Cmlr表示氯霉素抗性基因，ccdB基因表達產(chǎn)物能抑制大腸桿菌DNA復(fù)制。圖中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點，且不同種限制酶識別序列不同，其中AiuⅠ、XbaⅠ、SspⅠ和MfeⅠ識別的堿基序列和酶切位點分別是AG↓CT、T↓CTAGA、AAT↓ATT、C↓AATTG，請分析回答：
（1）為獲得大量AH基因的cDNA．需從瀾斗鞫蛛毒素肽分泌細(xì)胞提取RNA．反應(yīng)體系中需滲加特異性引物和逆轉(zhuǎn)錄酶和taq逆轉(zhuǎn)錄酶和taq酶。
（2）利用圖中的質(zhì)粒和AH基因構(gòu)建重組質(zhì)粒時，宜選用SspI和MfeISspI和MfeI雙酶切目的基因，再選用Aiu和MfeIAiu和MfeI切割質(zhì)粒，將切割后獲得的DNA片段混合，經(jīng)DNA連接酶處理后，再與大腸桿菌混合培養(yǎng)。在含有適量氯霉素氯霉素的培養(yǎng)基中添加適量冷凍的CaCl2，以促進目的基因轉(zhuǎn)化。
（3）經(jīng)上述處理培養(yǎng)后，獲得存活的大腸桿菌中應(yīng)含有的質(zhì)粒是重組質(zhì)粒重組質(zhì)粒（“普通質(zhì)?！被颉爸亟M質(zhì)?！保?，原因是重組質(zhì)粒中的ccdB基因被破壞，不能抑制DNA復(fù)制重組質(zhì)粒中的ccdB基因被破壞，不能抑制DNA復(fù)制。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶和taq；SspI和MfeI；Aiu和MfeI；氯霉素；重組質(zhì)粒；重組質(zhì)粒中的ccdB基因被破壞，不能抑制DNA復(fù)制
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：32引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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