PCR定點(diǎn)突變技術(shù)是最常用的基因突變技術(shù)，通過定點(diǎn)誘變可以在體外改造DNA分子。重疊延伸PCR是發(fā)展最早的PCR定點(diǎn)突變技術(shù)，操作過程如圖1?？赏ㄟ^測序檢驗(yàn)定點(diǎn)突變是否成功?，F(xiàn)欲將改造后的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌，質(zhì)粒結(jié)構(gòu)如圖2?；卮鹣铝袉栴}：
（1）圖1所示重疊延伸PCR中，第1對引物是 突變引物FP2和通用引物RP2突變引物FP2和通用引物RP2；在第1對引物組成的反應(yīng)系統(tǒng)和第2對引物組成的反應(yīng)系統(tǒng)中各進(jìn)行一次復(fù)制，共產(chǎn)生 33種DNA分子；此過程不能將兩對引物共置于同一反應(yīng)系統(tǒng)中，原因是 突變引物FP2和突變引物RP1可以互補(bǔ)配對，導(dǎo)致引物失效突變引物FP2和突變引物RP1可以互補(bǔ)配對，導(dǎo)致引物失效。
（2）圖1所示DNA分子不能延伸，原因是 DNA單鏈延伸的方向必須是5’到3’DNA單鏈延伸的方向必須是5’到3’。
（3）分析圖1和圖2，要將突變的基因定向插入質(zhì)粒并構(gòu)建表達(dá)載體，應(yīng)如何設(shè)計(jì)通用引物FP1和通用引物RP2？應(yīng)保證突變基因右側(cè)應(yīng)是CTAG應(yīng)保證突變基因右側(cè)應(yīng)是CTAG。
（4）為篩選出含有目的基因的大腸桿菌，通常采用影印法（使用無菌的絨氈布壓在培養(yǎng)基A的菌落上，帶出少許菌種，平移并壓在培養(yǎng)基B上，結(jié)果如圖3）。培養(yǎng)基A中應(yīng)添加 氨芐青霉素氨芐青霉素，培養(yǎng)基B中應(yīng)添加 四環(huán)素四環(huán)素，含有重組質(zhì)粒的菌落是 4、64、6（填寫數(shù)字），原因是 用兩種限制酶對質(zhì)粒進(jìn)行切割時，會破壞四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生存，但不能在含有四環(huán)素培養(yǎng)基上生存用兩種限制酶對質(zhì)粒進(jìn)行切割時，會破壞四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生存，但不能在含有四環(huán)素培養(yǎng)基上生存。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；基因工程的操作過程綜合．
【答案】突變引物FP2和通用引物RP2；3；突變引物FP2和突變引物RP1可以互補(bǔ)配對，導(dǎo)致引物失效；DNA單鏈延伸的方向必須是5’到3’；應(yīng)保證突變基因右側(cè)應(yīng)是CTAG；氨芐青霉素；四環(huán)素；4、6；用兩種限制酶對質(zhì)粒進(jìn)行切割時，會破壞四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生存，但不能在含有四環(huán)素培養(yǎng)基上生存
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：40引用：2難度：0.5
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1．以下是有關(guān)分離與鑒別DNA的技術(shù)，其中說法正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 16:30:6組卷：5引用：1難度：0.5 -
2．科研人員克隆了豬白細(xì)胞抗原基因（SLA-2基因），構(gòu)建了該基因的真核表達(dá)載體，進(jìn)行了豬腎上皮細(xì)胞表達(dá)研究。實(shí)驗(yàn)的主要流程如圖1，SLA-2基因長度為1100bp,質(zhì)粒B的總長度為4445bp,其限制酶切點(diǎn)后的數(shù)字表示距復(fù)制原點(diǎn)的距離。請回答：
（1）過程①中，PCR擴(kuò)增SLA-2的原理是限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識別序列及切割位點(diǎn) T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC ，下列4種引物中應(yīng)選擇的是。
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
（2）過程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是，該過程需要用處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。然后將大腸桿菌涂布在含有（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳，請?jiān)诖痤}紙相應(yīng)位置畫出可能得到的電泳條帶。
（4）科研中常用呤霉素對真核細(xì)胞進(jìn)行篩選，一般選擇最低致死濃度的前一個濃度作為篩選濃度的原因是：既可以讓大部分沒有抗性的細(xì)胞死亡又不會讓。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為。
（5）過程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測腎上皮細(xì)胞生產(chǎn)的抗原肽，其原理是，單克隆抗體能檢測其是否具有正確的，從而是否具有生物活性。
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：41引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”的實(shí)驗(yàn)，說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：3引用：1難度：0.6
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