乙烯具有促進(jìn)果實(shí)成熟的作用，ACC氧化酶和ACC合成酶是番茄細(xì)胞合成乙烯的兩個(gè)關(guān)鍵酶。利用反義DNA技術(shù)（原理如圖1），可以抑制這兩個(gè)基因的表達(dá)，從而使番茄具有耐儲(chǔ)存、宜運(yùn)輸?shù)膬?yōu)點(diǎn)，圖2為融合ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因的反義表達(dá)載體的結(jié)構(gòu)示意圖。

（1）圖2中的2A11為特異性啟動(dòng)子，則該2A11應(yīng)在番茄的

果實(shí)

果實(shí)

（器官）中啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄。從該器官中提取

（總）RNA

（總）RNA

為模板，利用反轉(zhuǎn)錄法合成ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因，以進(jìn)行拼接構(gòu)成融合基因。
（2）合成出的ACC氧化酶基因兩端分別含限制酶BamH I和EcoR I的酶切位點(diǎn)，ACC合成酶基因兩端含Kpn I和Sau3A I的酶切位點(diǎn)，這四種限制酶及其識別序列和切割位點(diǎn)如圖：

限制性核酸內(nèi)切酶	識別序列和切割位點(diǎn)	限制性核酸內(nèi)切酶	識別序列和切割位點(diǎn)
BamH I	G↓GATCC	Kpn I	GGTAC↓C
EcoR I	G↓AATTC	Sau3A I	↓GATC

先用限制酶

BamHⅠ和Sau3AⅠ

BamHⅠ和Sau3AⅠ

分別對ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因進(jìn)行切割后，再將它們拼接成融合基因，相應(yīng)的Ti質(zhì)粒和融合基因均使用限制酶

EcoRⅠ和KpnⅠ

EcoRⅠ和KpnⅠ

進(jìn)行切割，以確保融合基因能夠插入載體中。載體上卡那霉素抗性基因的作用是

便于重組DNA的篩選

便于重組DNA的篩選

。
（3）為了獲得耐運(yùn)儲(chǔ)存、宜儲(chǔ)存的番茄，應(yīng)將融合基因

反向

反向

（填“正向”或“反向”）插入啟動(dòng)子2A11的下游，原因是

只有反向插入，轉(zhuǎn)錄出的mRNA堿基序列才跟目的基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA形成互補(bǔ)雙鏈RNA，使目的基因不能表達(dá)

只有反向插入，轉(zhuǎn)錄出的mRNA堿基序列才跟目的基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA形成互補(bǔ)雙鏈RNA，使目的基因不能表達(dá)

，從而抑制乙烯的合成。在檢測該融合基因是否整合到番茄植株的染色體DNA上時(shí)，

不能

不能

（填“能”或“不能”）用放射性物質(zhì)標(biāo)記的ACC合成酶基因片段做探針進(jìn)行檢測，理由是

番茄細(xì)胞內(nèi)本來存在ACC合成酶基因，能與ACC合成酶基因探針發(fā)生分子雜交

番茄細(xì)胞內(nèi)本來存在ACC合成酶基因，能與ACC合成酶基因探針發(fā)生分子雜交

。