人體肝臟細胞中的乙醛脫氫酶2(ALDH2)是人體酒精代謝中的關鍵酶。研究人員利用定點誘變技術對ALDH2基因進行改造后在大腸桿菌中表達,獲得具有較好溶解性的乙醛脫氫酶2。所用質粒和操作過程如圖。其中,Ampr為氨芐青霉素抗性基因,Tetr為四環(huán)素抗性基因。質粒的外側鏈為a鏈,內側鏈為b鏈?;駻mpr轉錄的模板鏈屬于a鏈的片段。改造后的ALDH2基因編碼區(qū)首端到末端(其中一條鏈)的序列為5′-ATCCATGCGCTC…(中間核苷酸序列)CAGTGAGTAGCG-3′。四種限制酶的識別序列及切割位點見下表。請回答下列問題:
限制酶 | BamHⅠ | PstⅠ | XhoⅠ | XbaⅠ |
識別序列和切割位點(5′→3′) | G↓GATCC | C↓TGCAG | C↓TCGAG | T↓CTAGA |
不存在
不存在
(選填“存在”或“不存在”)的蛋白質。(2)質粒復制的模板鏈是
a和b
a和b
(選填“a”、“b”、“a和b”、“a或b”)鏈,基因Tet轉錄的模板鏈屬于 b鏈
b鏈
的片段。若用Xh0I切割質粒后,形成的單鏈末端堿基序列為 TCGA—
TCGA—
。(3)過程②需要的酶是
限制酶(或BamHⅠ、XabⅠ)和DNA連接酶
限制酶(或BamHⅠ、XabⅠ)和DNA連接酶
。過程③常采用 CaCl2
CaCl2
處理以提高操作效果。經(jīng)過程④,在培養(yǎng)基上能形成菌落的大腸桿菌類型有 導入空白質粒的和導入重組質粒的
導入空白質粒的和導入重組質粒的
。(4)為擴增目的基因,某同學設計了如下六種PCR引物,其中可選用(符合題意)的一對引物是
②⑤
②⑤
(選填數(shù)字序號)。根據(jù)選定的引物,至少需經(jīng)過 6
6
次循環(huán),可獲得32個符合要求的目的基因。①5′-TCTAGAATCCATGCGCTC-3′
②5′-TCTAGACGCTACTCACTG-3′
③5′-CTGCAGATCCATGCGCTC-3′
④5′-GGATCCCGCTACTCACTG-3′
⑤5′-GGATCCATCCATGCGCTC-3′
⑥5′-CTCGAGCGCTACTCACTG-3′
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】不存在;a和b;b鏈;TCGA—;限制酶(或BamHⅠ、XabⅠ)和DNA連接酶;CaCl2;導入空白質粒的和導入重組質粒的;②⑤;6
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:59引用:3難度:0.6
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發(fā)布:2024/12/20 5:0:2組卷:35引用:5難度:0.6 -
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(2)為確保目的基因定向插入了質粒,應該選擇
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限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識別序列及切割位點 G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
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