甜玉米與普通玉米相比，甜玉米中可溶性糖向淀粉的轉(zhuǎn)化較慢導致可溶性糖含量高，汁多質(zhì)脆，富含多種維生素。為了使甜玉米更富有生產(chǎn)應用價值，科研人員通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出了超量表達P蛋白轉(zhuǎn)基因甜玉米。在超量表達P基因載體的構(gòu)建中，所用DNA片段和Ti質(zhì)粒的酶切位點如圖1所示?；卮鹣铝袉栴}：

（1）強啟動子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，能被識別并結(jié)合，驅(qū)動基因的持續(xù)轉(zhuǎn)錄。為使P基因在玉米植株中超量表達，應優(yōu)先選用

BamHⅠ和SacⅠ

BamHⅠ和SacⅠ

酶組合，將DNA片段和Ti質(zhì)粒切開后構(gòu)建重組表達載體。
（2）外植體經(jīng)脫分化形成的玉米放入農(nóng)桿菌液浸泡后進行植物組織培養(yǎng)，培養(yǎng)基中需加入

潮霉素

潮霉素

進行篩選，最終獲得多個玉米株系a₁、a₂、a₃、a₄。通過對a₁、a₂、a₃、a₄四株甜玉米株系的蛋白質(zhì)表達量進行測定結(jié)果如圖2，導致a₄株系的表達量低于野生型的原因是

a₄株系玉米中可能未導入重組質(zhì)?；?qū)肽康幕蛭幢磉_

a₄株系玉米中可能未導入重組質(zhì)?；?qū)肽康幕蛭幢磉_

。
（3）真核基因的編碼區(qū)含有內(nèi)含子和外顯子，圖3為淀粉酶合成基因片段，其轉(zhuǎn)錄后形成的前體RNA需通過剪接（切去內(nèi)含子對應序列）和加工后方能用于翻譯。為了進一步提高甜玉米中淀粉的含量，科研人員提出通過降低淀粉酶合成有關(guān)基因的表達實現(xiàn)生產(chǎn)目標。研究人員研究發(fā)現(xiàn)嗎啉反義寡核苷酸是一種RNA剪接抑制劑，將其注入植物細胞內(nèi)會使基因表達受阻，科研人員將嗎啉反義寡核苷酸導入玉米的受精卵中起到明顯效果。針對它的具體作用，科研人員提出以下假說：
假說1：導致RNA前體上內(nèi)含子1的對應序列不能被剪。
假說2：導致RNA前體上內(nèi)含子1和外顯子2的對應序列同時被剪切。
①為了驗證上述假說，分別從受精卵發(fā)育后3天的實驗組和對照組胚細胞中提取，逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA。若假說1成立，使用如圖所示引物2和引物4進行PCR后電泳的結(jié)果為

AD

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（填字母）。
A．實驗組有目的條帶
B．實驗組無目的條帶
C．對照組有目的條帶
D．對照組無目的條帶
②若要證明假說2成立，需要選擇如圖

3和4

3和4

所示引物進行PCR。
③某次實驗結(jié)果電泳發(fā)現(xiàn)：實驗組和對照組都沒有任何條帶，從PCR操作過程角度解釋可能的原因是

退火溫度太高、引物自連或互連

退火溫度太高、引物自連或互連

（至少寫出兩點）。