乙酰膽堿酯酶（AChE）是催化乙酰膽堿分解的水解酶，還能與有機(jī)磷農(nóng)藥發(fā)生特異反應(yīng)，在水質(zhì)檢測中可用于有機(jī)磷農(nóng)藥污染的快速檢測，乙酰膽堿酯酶對防治人類疾病、保護(hù)生態(tài)環(huán)境等方面的研究具有非常重要的意義?；卮鹣铝袉栴}：
（1）AChE的提取與純化：AChE廣泛存在于各種動(dòng)物組織中，欲從動(dòng)物肝臟中提取AChE，獲取新鮮肝臟后，必須立即處理或低溫保存，因?yàn)?乙酰膽堿酯酶很有可能失去活性乙酰膽堿酯酶很有可能失去活性。將豬肝切碎后，加低溫蒸餾水，為了防止血液過快的凝結(jié)，可適量加入 血液抗凝劑血液抗凝劑，在組織搗碎機(jī)中搗碎后離心，取 上清液上清液用于進(jìn)一步分離和純化。
（2）AChE的基因克隆技術(shù)：利用PCR技術(shù)或RT-PCR技術(shù)（即利用逆轉(zhuǎn)錄和PCR技術(shù)）克隆AChE基因時(shí)，反應(yīng)體系中均需要加入 耐高溫的TaqDNA聚合耐高溫的TaqDNA聚合酶，加入dNTP用于提供 原料和能量原料和能量。PCR產(chǎn)物經(jīng) 凝膠電泳凝膠電泳技術(shù)純化后，可用 限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接酶處理回收的DNA和克隆載體，獲得重組DNA分子，最終達(dá)到體內(nèi)克隆AChE基因的目的。
（3）AChE的基因表達(dá)：若構(gòu)建大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，最好選擇 RT-PCRRT-PCR技術(shù)（填“PCR”或“RT-PCR”）獲取AChE基因．與克隆AChE基因相比，表達(dá)載體中還需要加入大腸桿菌的 啟動(dòng)子和終止子啟動(dòng)子和終止子等。在培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，常使用 LB液體LB液體培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，用 稀釋涂布平板稀釋涂布平板法接種到平板上，更易獲得相應(yīng)菌株。
（4）研究人員在進(jìn)行某地水質(zhì)檢測時(shí)，發(fā)現(xiàn)水樣能與AChE發(fā)生特異反應(yīng)，若不及時(shí)治理，可能會(huì)造成水體 富營養(yǎng)化富營養(yǎng)化。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；基因工程的操作過程綜合．
【答案】乙酰膽堿酯酶很有可能失去活性；血液抗凝劑；上清液；耐高溫的TaqDNA聚合；原料和能量；凝膠電泳；限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接；RT-PCR；啟動(dòng)子和終止子；LB液體；稀釋涂布平板；富營養(yǎng)化
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：8引用：2難度：0.5
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="http://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴(kuò)增目的基因，還可用于定點(diǎn)誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點(diǎn)突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進(jìn)行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物，得到兩個(gè)常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計(jì)突變上游引物，突變位點(diǎn)位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進(jìn)行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個(gè)常規(guī)上游引物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增，得到突變目的基因序列。回答下列問題：
（1）PCR擴(kuò)增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該P(yáng)CR擴(kuò)增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應(yīng)中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過次復(fù)制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是。
（3）如果要利用微生物進(jìn)一步克隆PCR定點(diǎn)誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達(dá)載體導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞，將馬鈴薯細(xì)胞培養(yǎng)成幼苗時(shí)經(jīng)過的兩個(gè)過程是。檢測目的基因是否在馬鈴薯細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說法錯(cuò)誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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