蜘蛛絲（絲蛋白）被稱為“生物鋼”，有著超強(qiáng)的抗張強(qiáng)度?？芍瞥煞缽棻承?、人造韌帶等。蜘蛛通過在腹部的腺體生成蜘蛛絲，并使用一種名為“噴絲頭”的器官將蛛絲排出體外。由于蜘蛛會(huì)互相攻擊，吃掉同類，因此無法像蠶絲一樣通過養(yǎng)殖大量生產(chǎn)。利用現(xiàn)代生物技術(shù)生產(chǎn)蜘蛛絲不斷取得成功，請(qǐng)回答下列問題：
運(yùn)用基因工程技術(shù)已經(jīng)創(chuàng)造出了“蜘蛛羊”過程如圖1，回答下列問題：

（1）蛛絲蛋白基因可從蜘蛛的

cDNA

cDNA

文庫中獲取，獲取的基因不含啟動(dòng)子。甲過程需用到的工具是

限制酶、DNA連接酶、載體

限制酶、DNA連接酶、載體

（填工具名稱）。檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞可用DNA分子雜交技術(shù)，要用

放射性同位素或熒光分子標(biāo)記含目的基因的單鏈DNA片段

放射性同位素或熒光分子標(biāo)記含目的基因的單鏈DNA片段

作探針。
（2）重組細(xì)胞培養(yǎng)成早期胚胎的過程中，需要提供

無菌

無菌

、無毒的條件，若在培養(yǎng)基中加入抗生素

能

能

（能、不能）抑制真菌的生長(zhǎng)。若成功導(dǎo)入目的基因的轉(zhuǎn)基因羊并沒有產(chǎn)生相應(yīng)的蛛絲蛋白，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是

蛛絲蛋白基因沒有轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄的mRNA沒有翻譯

蛛絲蛋白基因沒有轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄的mRNA沒有翻譯

。
（3）可將

細(xì)胞核移植

細(xì)胞核移植

技術(shù)結(jié)合基因工程等技術(shù)得到具有新性狀的克隆羊。
（4）如圖2為蛛絲蛋白基因?qū)?yīng)的DNA片段結(jié)構(gòu)示意圖。若用PCR技術(shù)獲取目的基因，則與之對(duì)應(yīng)的引物結(jié)合部位應(yīng)該是圖中的

2、3

2、3

（填數(shù)字）；該DNA分子在PCR儀中經(jīng)過4次循環(huán)，一共消耗每種引物數(shù)量

15

15

個(gè)。
蛛絲蛋白產(chǎn)量低，科學(xué)家嘗試用現(xiàn)代生物技術(shù)生產(chǎn)蛛絲蛋白，如利用微生物發(fā)酵，轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物等。家蠶是唯一可以通過人工養(yǎng)殖大量獲取絲纖維的動(dòng)物，由于蠶絲蛋白和蜘蛛絲蛋白在結(jié)構(gòu)上有一定的相似性，因此利用家蠶遺傳改造大量獲取類蜘蛛絲纖維是一個(gè)可行性高的策略。請(qǐng)回答下列問題：
（5）下列關(guān)于應(yīng)用現(xiàn)代生物技術(shù)生產(chǎn)蛛絲蛋白敘述不正確的是

ABC

ABC

。
A．不可采用細(xì)菌和植物作為表達(dá)體系，但可選用酵母菌作為表達(dá)體系
B．將含有絲蛋白基因的表達(dá)載體導(dǎo)入雌性動(dòng)物的乳腺細(xì)胞中可獲得乳腺生物反應(yīng)器
C．若受體細(xì)胞為大腸桿菌，菌落的大小、有無莢膜、隆起程度等肉眼可見的特征都可作為優(yōu)秀菌種鑒定的依據(jù)
D．篩選出高產(chǎn)蛛絲蛋白菌種需經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)，再接種到發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)
（6）中國(guó)科學(xué)院譚安江研究組發(fā)現(xiàn)家蠶絲蛋白的主要成分有絲素重鏈（FibH），絲素輕鏈（FibL），絲膠蛋白（Sericin）等，其中FibH約占整個(gè)絲蛋白含量的70%以上。研究組利用基因工程的方法在家蠶絲腺和蠶繭中大量表達(dá)蜘蛛絲蛋白，其主要思路是借助轉(zhuǎn)基因技術(shù)敲除

FibH的編碼區(qū)

FibH的編碼區(qū)

，同時(shí)保留了其上下游完整的調(diào)控序列，定點(diǎn)整合了含有部分蜘蛛絲基因和

熒光標(biāo)記基因

熒光標(biāo)記基因

的DNA片段，以便目的基因的篩選。
（7）研究人員發(fā)現(xiàn)若將蛛絲蛋白31號(hào)位的色氨酸替換為酪氨酸，蛛絲韌性可提高50%，利用蛋白質(zhì)工程對(duì)蛛絲蛋白進(jìn)行改造，基本途徑是：預(yù)期蛋白質(zhì)功能→

設(shè)計(jì)和改造

設(shè)計(jì)和改造

蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)→推測(cè)氨基酸序列→找到對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列。