圖示pIJ702是一種常用質粒，其中tsr為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而限制酶SacⅠ、SphⅠ，BglⅠ在pIJ702上分別只有一處識別序列。回答下列問題。
| 表1 | ||
| pIJ702 | pZHZ8 | |
| BglⅡ | 5.7kb | 6.7kb |
| 表2 | |||||
| 固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（μg/mL） | 0 | 1 | 2 | 5 | 10 |
| 不含質粒的鏈霉菌生長狀況 | +++++ | +++ | + | - | - |
| “+”表示生長；“-”表示不生長。 | |||||
磷酸二酯鍵
磷酸二酯鍵
的斷裂，切割形成的末端有黏性末端和平末端
黏性末端和平末端
兩種。（2）以SacⅠ和SphⅠ切取的目的基因置換質粒PIJ702上長度為0.4kb的SacⅠ/sphⅠ片段，構建重組質粒pZHZ8．上述兩種質粒的限制酶酶切片段長度見表1．由此判斷目的基因的片段長度為
1.4
1.4
kb,判定目的基因中含有一個BglⅡ切割位點的理由是pIJ702上的原有BglⅡ位點被目的基因置換得到的環(huán)狀pZHZ8，仍能被BglⅡ切割成一條線段
pIJ702上的原有BglⅡ位點被目的基因置換得到的環(huán)狀pZHZ8，仍能被BglⅡ切割成一條線段
。（3）導入目的基因時，首先用
Ca2+
Ca2+
處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)細胞，再將重組質粒pZHZ8溶于緩沖液
緩沖液
中與感受態(tài)細胞混合，在一定的溫度下可以促進鏈霉菌完成轉化
轉化
過程。（4）不含質粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養(yǎng)基上生長狀況如表2所示。若要篩選導入pZHZ8的鏈霉菌細胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應在
5
5
μg/mL以上，挑選成功導入pZHZ8的鏈霉菌的具體方法是根據導入pIJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導入pZHZ8的鏈霉菌蓋落呈白色的特點，通過觀察菌落的顏色進行挑選
根據導入pIJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導入pZHZ8的鏈霉菌蓋落呈白色的特點，通過觀察菌落的顏色進行挑選
。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】磷酸二酯鍵；黏性末端和平末端；1.4；pIJ702上的原有BglⅡ位點被目的基因置換得到的環(huán)狀pZHZ8，仍能被BglⅡ切割成一條線段；Ca2+；緩沖液；轉化；5；根據導入pIJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導入pZHZ8的鏈霉菌蓋落呈白色的特點，通過觀察菌落的顏色進行挑選
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：21引用：2難度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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