圖中甲表示含目的基因的DNA片段,圖乙表示質(zhì)粒(已知PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ三種限制酶切割后產(chǎn)生的黏性末端都不相同)。請回答下列問題:
(1)已知DNA的合成方向總是從子鏈的5'端向3'端延伸。利用PCR技術(shù)以圖甲中的DNA片段為模板擴增目的基因,需要的引物有 B、CB、C(從A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選擇)。利用PCR擴增目的基因的過程由高溫變性(90~95℃),低溫復(fù)性(55~60℃)、適溫延伸(70~75℃)三個步驟構(gòu)成一個循環(huán),為使得DNA聚合酶能夠重復(fù)利用,選用的酶應(yīng)在 90~9590~95℃處理后仍然具備催化活性。
(2)要保證目的基因能與圖乙中的質(zhì)粒準(zhǔn)接,要將(1)中選出的兩種引物的5'端分別添加 PstⅠPstⅠ、EcoRⅠEcoRⅠ兩種限制酶的識別序列。在此基礎(chǔ)上,對擴增的目的基因和質(zhì)粒都用這兩種限制酶處理,待基因表達載體構(gòu)建完成后,加入含大腸桿菌的轉(zhuǎn)化液中。含該重組質(zhì)粒的大腸桿菌單菌落 不能不能(填“能”或者“不能”)在含青霉素培養(yǎng)基存活。
(3)若要將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌,則一般先要用Ca2+處理大腸桿菌,目的是使大腸桿菌處于一種 吸收周圍環(huán)境中DNA分子吸收周圍環(huán)境中DNA分子生理狀態(tài)。
(4)基因工程的應(yīng)用十分廣闊,可用轉(zhuǎn)基因牛制作乳腺生物反應(yīng)器,從乳汁中提取藥物,則該操作過程中選擇的受體細(xì)胞是 牛的受精卵牛的受精卵,原因是 動物受精卵具有全能性動物受精卵具有全能性。
【考點】基因工程的操作過程綜合;DNA片段的擴增與電泳鑒定.
【答案】B、C;90~95;PstⅠ;EcoRⅠ;不能;吸收周圍環(huán)境中DNA分子;牛的受精卵;動物受精卵具有全能性
【解答】
【點評】
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