CD47是一種跨膜糖蛋白，肺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤細(xì)胞表面的CD47含量明顯高于正常細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)，利用抗體抑制腫瘤細(xì)胞表面的CD47蛋白的活性，可促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬腫瘤細(xì)胞。為制備抗CD47的單克隆抗體，科學(xué)家按如圖1流程進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。請回答下列問題：

（1）圖1EcoRI等均為限制酶，Kan^r、Tc^r分別為卡那霉素抗性基因、四環(huán)素抗性基因。為了構(gòu)建基因表達(dá)載體，應(yīng)該選用

BamHI和XhoI

BamHI和XhoI

酶切割外源DNA和質(zhì)粒DNA。
（2）為篩選成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌，利用圖中兩種標(biāo)記基因，篩選出

能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上生長，而不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長

能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上生長，而不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長

的大腸桿菌，利用該菌種獲得大量CD47蛋白。
（3）圖2中①是指從小鼠

脾臟

脾臟

中獲得免疫后B細(xì)胞，經(jīng)過選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞，還需進(jìn)行操作②

克隆化培養(yǎng)和抗體檢測

克隆化培養(yǎng)和抗體檢測

才可獲得能分泌抗CD47抗體的雜交瘤細(xì)胞。體外培養(yǎng)該細(xì)胞獲得大量單克隆抗體，需要滿足以下條件：無菌無毒環(huán)境，充足的營養(yǎng)和適宜溫度與pH，含有

95%空氣加5%CO₂

95%空氣加5%CO₂

的氣體環(huán)境。
（4）為驗(yàn)證抗CD47抗體對巨噬細(xì)胞吞噬腫瘤細(xì)胞的促進(jìn)作用，研究人員將巨噬細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞共同培養(yǎng)，加入適量抗CD47抗體，測定巨噬細(xì)胞的吞噬能力。要得出該結(jié)論還需要進(jìn)行的操作是

共同培養(yǎng)巨噬細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，但不加入抗CD47抗體，測定巨噬細(xì)胞的吞噬能力

共同培養(yǎng)巨噬細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，但不加入抗CD47抗體，測定巨噬細(xì)胞的吞噬能力

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