檢測淋巴細胞的增殖能力是評價機體細胞免疫功能的重要指標之一。MTT 法是利用活細胞代謝產(chǎn)生的琥珀酸脫氫酶將 MTT 還原成不溶于水的藍紫色結(jié)晶,測量該結(jié)晶的吸光值可反映細胞的增殖情況。為探究不同細胞濃度對細胞增殖能力的影響,請用下列實驗器材完成實驗設(shè)計并討論分析:
材料器具:大鼠外周血淋巴細胞(濃度為 107 個/ml),細胞培養(yǎng)瓶若干,CO2 培養(yǎng)箱,比色計,基礎(chǔ)培養(yǎng)基,血細胞計數(shù)板。
(要求與說明:實驗檢測指標為(1)△OD=實驗組 OD-對照組 OD;(2)單位細胞(107)增殖力(CCP)=△OD×107/細胞數(shù);(3)培養(yǎng)過程中細胞始終保持增殖能力,培養(yǎng) 48 小時后測量上述各指標。)
(1)實驗思路:①將大鼠外周血淋巴細胞分別稀釋配制成濃度為0.75×106、1.0×106、1.25×106、2×106、6×106的懸液;②取細胞培養(yǎng)瓶,隨機均分為7組,編號A-G,每組若干個。A-F組中加入適量且等量基礎(chǔ)培養(yǎng)基和等量不同濃度的淋巴細胞懸液,G組中加入與各組總體積相等的基礎(chǔ)培養(yǎng)基;③各組培養(yǎng)瓶置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時后,用比色計測量各組的OD值,用血細胞計數(shù)板計數(shù)培養(yǎng)后的細胞數(shù),并計算各組的△OD和CCP;④統(tǒng)計分析所得數(shù)據(jù)。①將大鼠外周血淋巴細胞分別稀釋配制成濃度為0.75×106、1.0×106、1.25×106、2×106、6×106的懸液;②取細胞培養(yǎng)瓶,隨機均分為7組,編號A-G,每組若干個。A-F組中加入適量且等量基礎(chǔ)培養(yǎng)基和等量不同濃度的淋巴細胞懸液,G組中加入與各組總體積相等的基礎(chǔ)培養(yǎng)基;③各組培養(yǎng)瓶置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時后,用比色計測量各組的OD值,用血細胞計數(shù)板計數(shù)培養(yǎng)后的細胞數(shù),并計算各組的△OD和CCP;④統(tǒng)計分析所得數(shù)據(jù)。。
(2)根據(jù)下表的實驗結(jié)果,繪制坐標曲線圖(X 軸刻度之間的實際距離不要求)
細胞濃度(個/ml) | 0.75×106 | 1.0×106 | 1.25×106 | 2×106 | 6×106 | 10.0×106 |
△OD | 0.005 | 0.020 | 0.045 | 0.035 | 0.040 | 0.040 |
CCP | 2 | 5 | 9 | 8 | 9 | 9 |
①△OD、CCP 值并未隨著細胞濃度增大而持續(xù)變大,可能的原因是
細胞密度過大可能引起接觸抑制及營養(yǎng)物質(zhì)過度消耗,抑制細胞增殖
細胞密度過大可能引起接觸抑制及營養(yǎng)物質(zhì)過度消耗,抑制細胞增殖
。②MTT 法除了能檢測細胞的增殖情況,還能用于檢測細胞的
死活(或存活情況)、細胞的代謝強度(或細胞的活力)
死活(或存活情況)、細胞的代謝強度(或細胞的活力)
(填兩種)。【考點】動物細胞培養(yǎng)的條件與過程.
【答案】①將大鼠外周血淋巴細胞分別稀釋配制成濃度為0.75×106、1.0×106、1.25×106、2×106、6×106的懸液;②取細胞培養(yǎng)瓶,隨機均分為7組,編號A-G,每組若干個。A-F組中加入適量且等量基礎(chǔ)培養(yǎng)基和等量不同濃度的淋巴細胞懸液,G組中加入與各組總體積相等的基礎(chǔ)培養(yǎng)基;③各組培養(yǎng)瓶置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時后,用比色計測量各組的OD值,用血細胞計數(shù)板計數(shù)培養(yǎng)后的細胞數(shù),并計算各組的△OD和CCP;④統(tǒng)計分析所得數(shù)據(jù)。;細胞密度過大可能引起接觸抑制及營養(yǎng)物質(zhì)過度消耗,抑制細胞增殖;死活(或存活情況)、細胞的代謝強度(或細胞的活力)
【解答】
【點評】
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