檢測(cè)淋巴細(xì)胞的增殖能力是評(píng)價(jià)機(jī)體細(xì)胞免疫功能的重要指標(biāo)之一。MTT 法是利用活細(xì)胞代謝產(chǎn)生的琥珀酸脫氫酶將 MTT 還原成不溶于水的藍(lán)紫色結(jié)晶,測(cè)量該結(jié)晶的吸光值可反映細(xì)胞的增殖情況。為探究不同細(xì)胞濃度對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響,請(qǐng)用下列實(shí)驗(yàn)器材完成實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)并討論分析:
材料器具:大鼠外周血淋巴細(xì)胞(濃度為 107 個(gè)/ml),細(xì)胞培養(yǎng)瓶若干,CO2 培養(yǎng)箱,比色計(jì),基礎(chǔ)培養(yǎng)基,血細(xì)胞計(jì)數(shù)板。
(要求與說明:實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)為(1)△OD=實(shí)驗(yàn)組 OD-對(duì)照組 OD;(2)單位細(xì)胞(107)增殖力(CCP)=△OD×107/細(xì)胞數(shù);(3)培養(yǎng)過程中細(xì)胞始終保持增殖能力,培養(yǎng) 48 小時(shí)后測(cè)量上述各指標(biāo)。)
(1)實(shí)驗(yàn)思路:①將大鼠外周血淋巴細(xì)胞分別稀釋配制成濃度為0.75×106、1.0×106、1.25×106、2×106、6×106的懸液;②取細(xì)胞培養(yǎng)瓶,隨機(jī)均分為7組,編號(hào)A-G,每組若干個(gè)。A-F組中加入適量且等量基礎(chǔ)培養(yǎng)基和等量不同濃度的淋巴細(xì)胞懸液,G組中加入與各組總體積相等的基礎(chǔ)培養(yǎng)基;③各組培養(yǎng)瓶置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)后,用比色計(jì)測(cè)量各組的OD值,用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)培養(yǎng)后的細(xì)胞數(shù),并計(jì)算各組的△OD和CCP;④統(tǒng)計(jì)分析所得數(shù)據(jù)。①將大鼠外周血淋巴細(xì)胞分別稀釋配制成濃度為0.75×106、1.0×106、1.25×106、2×106、6×106的懸液;②取細(xì)胞培養(yǎng)瓶,隨機(jī)均分為7組,編號(hào)A-G,每組若干個(gè)。A-F組中加入適量且等量基礎(chǔ)培養(yǎng)基和等量不同濃度的淋巴細(xì)胞懸液,G組中加入與各組總體積相等的基礎(chǔ)培養(yǎng)基;③各組培養(yǎng)瓶置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)后,用比色計(jì)測(cè)量各組的OD值,用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)培養(yǎng)后的細(xì)胞數(shù),并計(jì)算各組的△OD和CCP;④統(tǒng)計(jì)分析所得數(shù)據(jù)。。
(2)根據(jù)下表的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,繪制坐標(biāo)曲線圖(X 軸刻度之間的實(shí)際距離不要求)
細(xì)胞濃度(個(gè)/ml) | 0.75×106 | 1.0×106 | 1.25×106 | 2×106 | 6×106 | 10.0×106 |
△OD | 0.005 | 0.020 | 0.045 | 0.035 | 0.040 | 0.040 |
CCP | 2 | 5 | 9 | 8 | 9 | 9 |
①△OD、CCP 值并未隨著細(xì)胞濃度增大而持續(xù)變大,可能的原因是
細(xì)胞密度過大可能引起接觸抑制及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)過度消耗,抑制細(xì)胞增殖
細(xì)胞密度過大可能引起接觸抑制及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)過度消耗,抑制細(xì)胞增殖
。②MTT 法除了能檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況,還能用于檢測(cè)細(xì)胞的
死活(或存活情況)、細(xì)胞的代謝強(qiáng)度(或細(xì)胞的活力)
死活(或存活情況)、細(xì)胞的代謝強(qiáng)度(或細(xì)胞的活力)
(填兩種)。【考點(diǎn)】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件與過程.
【答案】①將大鼠外周血淋巴細(xì)胞分別稀釋配制成濃度為0.75×106、1.0×106、1.25×106、2×106、6×106的懸液;②取細(xì)胞培養(yǎng)瓶,隨機(jī)均分為7組,編號(hào)A-G,每組若干個(gè)。A-F組中加入適量且等量基礎(chǔ)培養(yǎng)基和等量不同濃度的淋巴細(xì)胞懸液,G組中加入與各組總體積相等的基礎(chǔ)培養(yǎng)基;③各組培養(yǎng)瓶置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)后,用比色計(jì)測(cè)量各組的OD值,用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)培養(yǎng)后的細(xì)胞數(shù),并計(jì)算各組的△OD和CCP;④統(tǒng)計(jì)分析所得數(shù)據(jù)。;細(xì)胞密度過大可能引起接觸抑制及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)過度消耗,抑制細(xì)胞增殖;死活(或存活情況)、細(xì)胞的代謝強(qiáng)度(或細(xì)胞的活力)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:2引用:1難度:0.7
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1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)是細(xì)胞工程的基本技術(shù),下列關(guān)于這兩項(xiàng)技術(shù)的敘述,正確的是( ?。?/h2>
發(fā)布:2024/12/31 1:30:1組卷:29引用:2難度:0.7 -
2.回答與基因工程、動(dòng)物克隆和胚胎工程有關(guān)的問題:
(1)幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分,幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi),可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。在進(jìn)行基因工程操作時(shí),可以從植物體中提取幾丁質(zhì)酶的mRNA,以mRNA為材料可以獲得cDNA,其原理是
(2)為了提高動(dòng)物成纖維細(xì)胞克隆形成率,可以選擇適宜的培養(yǎng)基、添加牛血清、以
(3)下列關(guān)于胚胎工程的敘述,錯(cuò)誤的是
A.在動(dòng)物的飼料中添加一定量的促性腺激素促使超數(shù)排卵
B.若在囊胚期進(jìn)行胚胎分割,內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割,滋養(yǎng)成則不必
C.可以從雌性動(dòng)物體內(nèi)卵泡處吸取卵泡液,取出卵母細(xì)胞進(jìn)一步培養(yǎng)成熟
D.胚胎成纖維細(xì)胞可以用于胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng),因?yàn)槠淠芊置谝种萍?xì)胞分化的物質(zhì)。發(fā)布:2025/1/5 8:0:1組卷:3引用:1難度:0.7 -
3.據(jù)國(guó)際糖尿病聯(lián)盟最新數(shù)據(jù),2021年全球約5.37億成人患有糖尿病,670萬成人因糖尿病或其并發(fā)癥死亡。如圖是研究人員提出的治療方案,請(qǐng)回答下列問題:
(1)從患者體內(nèi)獲得體細(xì)胞后,對(duì)其進(jìn)行的初次培養(yǎng)稱為
(2)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增正常胰島素基因的前提條件是
A.胰島素
B.胰島素mRNA
C.胰島素基因
D.胰島
(3)欲檢測(cè)胰島類似細(xì)胞是否具有胰島B細(xì)胞的正常生理功能,可設(shè)計(jì)如下實(shí)驗(yàn):將等量的胰島類似細(xì)胞與正常胰島B細(xì)胞分別加入兩組相等濃度的
(4)該治療糖尿病的方法與異體移植相比,突出的優(yōu)點(diǎn)是發(fā)布:2024/12/31 2:30:2組卷:35引用:2難度:0.6