2022年1月7日，馬蘭里大學(xué)的醫(yī)學(xué)中心成功將豬心臟移植到一名57歲的心臟病患者身上，雖然這顆心臟僅僅存活了2個(gè)月時(shí)間，但仍然為異種器官移植的可行性提供了可觀的數(shù)據(jù)。然而心臟移植過程中會(huì)發(fā)生缺血再灌注損傷（IRI），可能導(dǎo)致心臟壞死。研究發(fā)現(xiàn)，IRI通過促進(jìn)Caspase8等一系列凋亡基因的表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡壞死，最終引起器官損傷。根據(jù)Caspase8基因合成的小干擾RNA（siRNA）可以使Caspase8基因沉默，有效抑制IRI所致的器官損傷。圖1是利用豬的心肌細(xì)胞開展siRNA作用研究的示意圖。根據(jù)材料回答下列問題：

（1）圖1中步驟②構(gòu)建重組質(zhì)粒需要使用

限制酶

限制酶

、

DNA連接酶

DNA連接酶

等工具酶。
過程③中，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬的心肌細(xì)胞的方法是

顯微注射法

顯微注射法

。與直接將siRNA導(dǎo)入豬的心肌細(xì)胞相比，通過重組質(zhì)粒將siRNA對(duì)應(yīng)的DNA序列導(dǎo)入心肌細(xì)胞，其優(yōu)點(diǎn)是

通過重組質(zhì)粒將siRNA對(duì)應(yīng)的DNA序列導(dǎo)入心肌細(xì)胞，siRNA可隨重組質(zhì)粒增殖而持續(xù)產(chǎn)生，從而使靶基因長時(shí)間沉默

通過重組質(zhì)粒將siRNA對(duì)應(yīng)的DNA序列導(dǎo)入心肌細(xì)胞，siRNA可隨重組質(zhì)粒增殖而持續(xù)產(chǎn)生，從而使靶基因長時(shí)間沉默

（答出一點(diǎn)）。
（2）研究人員根據(jù)Caspase8基因的堿基序列，設(shè)計(jì)了三種序列分別導(dǎo)入豬的心肌細(xì)胞，通過測(cè)定靶基因Caspase8的mRNA含量來確定最優(yōu)序列。測(cè)定mRNA含量時(shí)，需提取心肌細(xì)胞的總RNA，經(jīng)過

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

過程得到cDNA，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，測(cè)定PCR產(chǎn)物量，結(jié)果如圖2所示。據(jù)此判斷最優(yōu)序列是

序列2

序列2

。
（3）你認(rèn)為將豬心臟移植到人體面臨的最大挑戰(zhàn)是

免疫排斥反應(yīng)

免疫排斥反應(yīng)

，請(qǐng)說出一種解決這一問題的思路：

利用基因工程技術(shù)將豬與免疫排斥有關(guān)的抗原基因敲除，轉(zhuǎn)入一些人類特有蛋白的基因，將豬細(xì)胞偽裝為人的細(xì)胞

利用基因工程技術(shù)將豬與免疫排斥有關(guān)的抗原基因敲除，轉(zhuǎn)入一些人類特有蛋白的基因，將豬細(xì)胞偽裝為人的細(xì)胞

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