玉米螟和田間雜草嚴(yán)重影響玉米的生長(zhǎng)發(fā)育，導(dǎo)致玉米產(chǎn)量和品質(zhì)下降，科研人員將crylAb、crylF（cry基因來(lái)源于蘇云金芽孢桿菌，其編碼的殺蟲(chóng)蛋白能抑制玉米螟等玉米害蟲(chóng)）和cp4epsps基因（cp4epsps基因來(lái)源于土壤根瘤農(nóng)桿菌，其編碼的蛋白質(zhì)對(duì)除草劑草甘膦不敏感）構(gòu)建在同一載體上，并利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化到玉米中，獲得具有抗蟲(chóng)和耐除草劑性狀的轉(zhuǎn)基因玉米株系BFL4-1?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）為實(shí)現(xiàn)3種目的基因的擴(kuò)增，正常情況下需要制備

6

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種引物，引物的作用是

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸

。在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，通常需要在目的基因前后引入兩種限制酶的切割位點(diǎn)，該方法比用同一種酶進(jìn)行酶切的優(yōu)勢(shì)

防止目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化，防止目的基因反向連接等

防止目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化，防止目的基因反向連接等

。（答出兩點(diǎn)）
（2）下表為檢測(cè)與鑒定含目的基因植株的4種方法。預(yù)測(cè)同一后代群體中，4種方法檢出的含目的基因植株的比例從小到大依次是

X₄、X₃、X₂、X₁

X₄、X₃、X₂、X₁

。

方法	檢測(cè)對(duì)象	檢測(cè)目標(biāo)	檢出的含目的基因 植株的比例
PCR擴(kuò)增	基因組DNA	目的基因	X1
分子雜交	總mRNA	目的基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物	X2
抗原—抗體雜交	總蛋白質(zhì)	目的基因編碼的蛋白質(zhì)	X3
個(gè)體鑒定	幼苗	抗除草劑和抗蟲(chóng)幼苗	X4

（3）在植物體細(xì)胞雜交中為保證原生質(zhì)體在制備過(guò)程中的完整性，經(jīng)常需要將原生質(zhì)體放入適宜濃度的甘露醇中以維持原生質(zhì)體形態(tài)。為探究玉米原生質(zhì)體制備中甘露醇溶液的適宜濃度，進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：
實(shí)驗(yàn)材料及用具：玉米單細(xì)胞懸液、濃度為2mol/L的甘露醇溶液、細(xì)胞壁水解酶、蒸餾水、培養(yǎng)瓶、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、顯微鏡（具有測(cè)距功能）等。
請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)補(bǔ)充完整：

用蒸餾水將濃度為2mol/L的甘露醇溶液稀釋為等濃度梯度的溶液，用相應(yīng)數(shù)量的培養(yǎng)瓶編號(hào)，加入相同且適量的植物單細(xì)胞懸液，再加入相同的細(xì)胞壁水解酶，然后將等濃度梯度的甘露醇溶液分別加入各個(gè)培養(yǎng)瓶中

用蒸餾水將濃度為2mol/L的甘露醇溶液稀釋為等濃度梯度的溶液，用相應(yīng)數(shù)量的培養(yǎng)瓶編號(hào)，加入相同且適量的植物單細(xì)胞懸液，再加入相同的細(xì)胞壁水解酶，然后將等濃度梯度的甘露醇溶液分別加入各個(gè)培養(yǎng)瓶中

，
處理相同且適宜時(shí)間后，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板和顯微鏡對(duì)各個(gè)培養(yǎng)瓶中的原生質(zhì)體計(jì)數(shù)，并測(cè)量原生質(zhì)體的體積，并記錄。其中原生質(zhì)體數(shù)目最多，且原生質(zhì)體體積最接近植物細(xì)胞體積對(duì)應(yīng)的濃度即是最適宜的甘露醇溶液濃度。