紹興故有“黃酒之鄉(xiāng)”之稱，黃酒是中國最古老的酒種，享有“酒中之祖、酒中之王”的美譽，深得大眾喜愛。但研究發(fā)現(xiàn)黃酒中的潛在致癌物質(zhì)——氨基甲酸乙酯（EC）的含量遠高于其他酒。已知酒液中的EC主要由尿素和乙醇反應生成，而尿素主要由酵母菌代謝產(chǎn)生。
如圖1為酵母菌細胞中尿素的來源去路：
請回答：
（1）降低黃酒中EC含量的關(guān)鍵是 降低黃酒中尿素的含量降低黃酒中尿素的含量。
（2）從基因角度分析，降低黃酒中EC含量的方法有：抑制CAR1基因的表達抑制CAR1基因的表達或增強DUR1，2基因的表達。
（3）強啟動子具有與 RNA聚合酶RNA聚合酶結(jié)合，并多次啟動 轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄過程的功能，將目的基因（DUR1，2基因）與強啟動子結(jié)合可以增強目的基因的表達。
①要獲取目的基因，可以從 cDNA文庫cDNA文庫中釣取，獲得的目的基因不含啟動子，再進行 PCRPCR擴增。
②如圖2為目的基因部分序列：
應選擇的一對引物是：ACAC。
A．5'-ATGACAGTTAGT-3'
B．5'-TACTGCCGGTGA-3'
C．5'-TCACCGGCAGTA-3'
D．5'-ACTAACTGTCAT-3'
③如圖3所示，構(gòu)建基因表達載體時為避免反向拼接應選擇 EcoRⅠ和BamHⅠEcoRⅠ和BamHⅠ識別切割質(zhì)粒，再用 DNA連接酶DNA連接酶連接。已知目的基因上無相關(guān)酶切位點，應在引物的 5'5'（填“5'”或“3'”）端設(shè)計酶切序列，目的基因上游設(shè)計的酶切序列+引物序列為5'-GAATTCATGACAGTTAGTGAATTCATGACAGTTAGT-3'。
④已知DUR1，2基因的轉(zhuǎn)錄模板鏈為A鏈，若DUR1，2基因反向連接，構(gòu)建出反義DUR1，2基因，則其轉(zhuǎn)錄模板鏈為 BB鏈。造成的結(jié)果是轉(zhuǎn)反義DUR1，2基因酵母工程菌中內(nèi)源的DUR1，2基因表達受阻，原因可能是 以B鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA與以A鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA配對形成雙鏈，抑制了DUR1，2基因的表達以B鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA與以A鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA配對形成雙鏈，抑制了DUR1，2基因的表達。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】降低黃酒中尿素的含量；抑制CAR1基因的表達；RNA聚合酶；轉(zhuǎn)錄；cDNA文庫；PCR；AC；EcoRⅠ和BamHⅠ；DNA連接酶；5'；GAATTCATGACAGTTAGT；B；以B鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA與以A鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA配對形成雙鏈，抑制了DUR1，2基因的表達
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/8/25 2:0:8組卷：13引用：2難度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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